白血球接着分子発現抑制のsiRNA発現ベクターによる脈絡膜新生血管の治療の開発

使用抑制白细胞粘附分子表达的siRNA表达载体开发脉络膜新生血管治疗方法

基本信息

批准号：
21791700
负责人：
平野佳男
金额：
$ 2.33万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21791700/
关键词：
白血球接着分子脈絡膜新生血管 RNA干渉

项目摘要

加齢黄斑変性における脈絡膜新生血管発症過程においても他の新生血管同様に白血球が関与していると考えられている。白血球の接着、その後に起こる炎症や血管新生において重要な役割を担っているのが血管内皮細胞におけるICAM-1であるが、そのICAM-1をコントロールすることはこれら疾患の治療につながると考えられる。我々はRNA干渉技術を用い、マウス網膜のICAM-1をノックダウンし、脈絡膜新生血管を抑制することを試みることを目的とした。まずは、siRNAの網膜細胞への導入の有無を確認するために、導入確認用のGFP発現plasmidを静脈内(hydrodynamics based transfection法)あるいは硝子体に投与した。静脈内、硝子体内投与後いずれも網膜の細胞内にGFPが発現していることが確認できたが、静脈内投与でより高い導入効果がみられた。次に目的遺伝子であるICAM-1に対するsiRNA発現ベクター用オリゴの設計、合成を行った(5'-ACC GAT CGT CAC GGC GAT TTA TAA GTT CTC TAT AAA TCG CCG TGA CGA TCT TTT TC-3')。それをベクターヘクローニングした。このように作成したsiRNA plasmidを静脈内注射あるいは硝子体内に投与した。対照として、scramble control siRNAを使用した。ICAM-1の過剰な発現方法は、汎網膜光凝固あるいはストレプトゾトシンによるマウス糖尿病モデルを使用した。治療群では網膜あるいは網膜色素上皮-脈絡膜におけるICAM-1の過剰な発現が抑制されたが、対照群では過剰に発現したICAM-1が抑制されなかった。今後は網膜光凝固で実験的脈絡膜新生血管を作成し、上記のように作成したICAM-1をターゲットとしたsiRNA plasmidの投与により、脈膜膜新生血管を抑制することができるか検討を行う予定である。

与其他新生血管一样，白细胞被认为参与年龄相关性黄斑变性中脉络膜新生血管形成的过程。血管内皮细胞中的ICAM-1在白细胞粘附以及随后的炎症和血管生成中发挥重要作用，并且控制ICAM-1被认为可以导致这些疾病的治疗。我们的目标是利用 RNA 干扰技术敲低小鼠视网膜中的 ICAM-1 并抑制脉络膜新生血管形成。首先，为了确认siRNA是否被引入视网膜细胞中，将表达GFP的质粒静脉内施用(基于流体动力学的转染方法)或玻璃体中以确认引入。尽管在静脉内和玻璃体内施用后都证实了GFP在视网膜细胞中表达，但静脉内施用观察到更高的引入效果。接下来，设计并合成了用于靶基因ICAM-1的siRNA表达载体的寡核苷酸(5'-ACC GAT CGT CAC GGC GAT TTA TAA GTT CTC TAT AAA TCG CCG TGA CGA TCT TTT TC-3')。它被克隆到载体中。将如此制备的siRNA质粒静脉内或玻璃体内施用。作为对照，使用扰乱对照siRNA。为了过度表达 ICAM-1，我们使用了全视网膜光凝或链脲佐菌素的小鼠糖尿病模型。在治疗组中，视网膜或视网膜色素上皮-脉络膜中ICAM-1的过度表达被抑制，但在对照组中，ICAM-1的过度表达没有被抑制。将来，我们计划使用视网膜光凝术创建实验性脉络膜新生血管，并研究是否可以通过施用如上所述创建的靶向ICAM-1的siRNA质粒来抑制脉络膜新生血管。