XBP1mRNAスプライシングに関わる因子の探索とそのスプライシング機構の解明

寻找XBP1 mRNA剪接相关因子并阐明剪接机制

基本信息

  • 批准号:
    09J55502
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.9万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2009
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2009 至 2010
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

分泌タンパク質の膜輸送の起点となる小胞体に不完全なおりたたみ状態のタンパク質が蓄積すると(この状態を「小胞体ストレス」と呼ぶ)、細胞に様々な障害をもたらす。そこで細胞はこの状態を感知し、これに対処するための応答経路を発達させてきた。ほ乳動物では、小胞体ストレス応答の一環として、転写因子XBP1の前駆体mRNA (XBP1s mRNA)がスプライソソーム非依存的に、細胞質にてスプライシングを受ける。しかし、このスプライシングに関する細かな分子機構、特にその連結反応の仕組みは不明である。そこで、XBP1u mRNAスプライシング機構を明らかにするために、このXBP1u mRNAスプライシング反応をin vitroにて再構成し解析を行った。その結果、in vivoでのこれまでの解析結果から予測されたように、ほ乳類細胞の細胞質に高いRNA連結酵素活が存在した。また興味深いことに、ほ乳類細胞質に存在するRNA ligaseによる連結反応は、ホスホジエステル結合形成の過程において、酵母で確認されていた機構と異なる反応で行われていた。in vitro再構成系をもちいた解析によって、この特殊な.XBP1u mRNAスプライシング機構の特徴が示された。XBP1u mRNAスプライシング再構成系は、ほ乳類細胞質に存在するRNA ligaseの特徴を明らかにし、すなわち細胞質で起きるXBP1u mRNAスプライシング機構の解明に繋がる有用な解析手段である。
当不完整的折叠蛋白积聚在地方性蛋白质膜转运中时,这是膜转运的起点(该状态称为“内极应力”)时,它为细胞带来了各种障碍。因此,细胞已经感觉到了这种状态,并开发了解决此问题的响应路径。在乳腺动物中,作为EROLOS应激反应的一部分,转录因子XBP1前体mRNA(XBP1S mRNA)在没有刺存在的无刺存在的细胞质中接受剪接。但是,尚不清楚有关该剪接的细分子机制,尤其是巩固反应。因此,为了阐明XBP1U mRNA纵向机制,重建和分析了该XBP1U mRNA Spracing反应。结果,如先前的分析所预测的导致体内,哺乳动物细胞的细胞在RNA细胞中很高。有趣的是,存在于乳腺细胞中的RNA连接酶的巩固反应与在形成Hos Hodo醚结合的过程中证实的机制不同的反应。对体外重建系统的分析显示了这种特殊的.xbp1u mRNA纵向机制的特征。 XBP1U mRNA弹性重建系统是一个有用的分析,意味着阐明哺乳动物细胞中RNA连接酶的特征,即阐明XBP1U mRNA纵向机制,发生在细胞质中。

项目成果

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