魚類生殖系列キメラを用いた絶滅危惧種の保存と復活

利用鱼类种系嵌合体保护和复兴濒危物种

• 批准号: 09J40133
• 负责人: 風藤 理恵
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J40133/
• 关键词: 生殖系列キメラ; 借腹生産; タナゴ; 絶滅危惧種; 胚操作; PGC; 保存; 復活; dnd; 不妊化

本研究は絶滅危惧種であるタナゴ類の保全と復活を目的とし、発生工学的手法を用いて対象種の生殖細胞を他魚種の生殖巣で生産するシステムを開発することを目指している。これまでに、対象種であるニッポンバラタナゴの始原生殖細胞(PGCs)を可視化し、その動態を人工培養下で観察することを可能とした。この可視化したPGCsを不妊化を施したゼブラフィッシュやキンギョに移植し、生殖系列キメラを作出したが、いづれのキメラにおいてもニッポンバラタナゴの配偶子は形成されていなかった。そこで、ニッポンバラタナゴに近縁なタイリクバラタナゴをホストとするために不妊化の条件を検討し、されに生殖系列キメラ作出を行った。1.タイリクバラタナゴの不妊化本種のdnd遺伝子に対するモルフォリノオリゴを用いて不妊化を施した個体の生殖腺を組織学的に調べたところ、20日齢の稚魚(浮上時)の生殖腺が対象魚と異なり未発達であった。このことから、本手法により不妊化を誘導できると考えられた。2.タイリクバラタナゴを宿主とした生殖系列キメラ作出胞胚期のタイリクバラタナゴの不妊化胚に蛍光ラベルしたニッポンバラタナゴのPGCを移植しキメラ胚を誘導した。移植したPGCは移動ルート上を自立的に移動していることが観察されたが、いづれのキメラ胚も正常に発生しなかった。これは従来の胚操作や培養方法がタイリクバラタナゴ胚に適していないことが考えられた。

这项研究旨在保护和恢复坦尼亚的濒危物种，并旨在开发一种系统，其中使用发育工程技术在其他鱼类的性腺中产生靶物质的生殖细胞。到目前为止，有可能可视化目标物种的原始生殖细胞（PGC），即日本的Balatinae，并观察人造培养中的动力学。这些可视化的PGC被移植到不育斑马鱼和鲷鱼中以产生种系嵌合体，但任何一种嵌合体中都没有形成日本巴拉塔哥的配子。因此，为了容纳灭菌条件，我们研究了不孕症的条件，并创建了种系嵌合体。 1。在该物种的DND基因中进行了灭菌的个体的正弦正弦性性腺不育症，与目标鱼不同，发现该物种的DND基因，20天大的煎炸（在表面上）的性腺被发现是无关紧要的。这表明该方法可以诱导不育症。 2。将日本巴坦戈的荧光标记的PGC植入了在囊泡阶段产生的种系嵌合体的无菌胚胎，并诱导了嵌合胚。尽管观察到植入的PGC是沿着运动途径自支撑的，但嵌合胚胎均未正常发展。这被认为是因为常规的胚胎操纵和培养方法不适合老虎石棺胚胎。

项目成果

Isolation of teleost primordial germ cells using flow cytometry

• DOI: 10.1387/ijdb.092914rg
• 发表时间: 2010-01-01
• 期刊: INTERNATIONAL JOURNAL OF DEVELOPMENTAL BIOLOGY
• 影响因子: 0.7
• 作者: Goto-Kazeto, Rie;Saito, Taiju;Yamaha, Etsuro
• 通讯作者: Yamaha, Etsuro

Molecular cloning, characterization and expression of thyroid-stimulating hormone receptor in channel catfish

• DOI: 10.1016/j.ygcen.2009.01.009
• 发表时间: 2009-05-01
• 期刊: GENERAL AND COMPARATIVE ENDOCRINOLOGY
• 影响因子: 2.7
• 作者: Goto-Kazeto, Rie;Kazeto, Yukinori;Trant, John M.
• 通讯作者: Trant, John M.

シシャモSpirinchus llanceolatusの初期発生ステージとPGCsの移動経路の解析

毛鳞鱼早期发育阶段及PGCs迁移途径分析

• 发表时间: 2010
• 作者: Goto-kazeto;R.;Kazeto;Y.;Trant;J.M.;藤本貴史・川上優・後藤理恵・荒井克俊・山羽悦郎;川上優・後藤理恵・藤本遺史・高橋芳幸・荒井克俊・山羽悦郎;仁木加寿子;高橋英佑・川上優・後藤理恵・藤本貴史・荒井克俊・新居久也・山羽悦郎
• 通讯作者: 高橋英佑・川上優・後藤理恵・藤本貴史・荒井克俊・新居久也・山羽悦郎

ガラス化凍結胚より摘出した資源生殖細胞移植による生殖系列キメラの作出

通过移植从玻璃化冷冻胚胎中提取的资源生殖细胞产生生殖系嵌合体

• 发表时间: 2010
• 作者: Goto-kazeto;R.;Kazeto;Y.;Trant;J.M.;藤本貴史・川上優・後藤理恵・荒井克俊・山羽悦郎;川上優・後藤理恵・藤本遺史・高橋芳幸・荒井克俊・山羽悦郎
• 通讯作者: 川上優・後藤理恵・藤本遺史・高橋芳幸・荒井克俊・山羽悦郎

異種間生殖系列キメラにおけるドナー細胞検出用種判別マーカーの開発

开发用于跨物种种系嵌合体中供体细胞检测的物种区分标记

• 发表时间: 2010
• 作者: Goto-kazeto;R.;Kazeto;Y.;Trant;J.M.;藤本貴史・川上優・後藤理恵・荒井克俊・山羽悦郎
• 通讯作者: 藤本貴史・川上優・後藤理恵・荒井克俊・山羽悦郎