融合細胞再分離による体細胞iPS細胞化技術の開発

通过融合细胞的再分离开发体细胞iPS细胞化技术

基本信息

批准号：
09J06384
负责人：
平野邦生
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

1. ヒト胚性幹(ES)細胞との細胞融合によるヒト体細胞のリプログラミング目的:電気的刺激による細胞融合技術により、ヒト体細胞をヒトES細胞に近い多能性幹細胞へとリプログラミングする。内容:ヒトES細胞とヒト胎児肺線維芽細胞とをトリプシン処理により単一細胞へ解離し、電気的刺激により細胞融合を誘導した。融合細胞を選択的培養条件で選別したところ、融合細胞は四倍体の核型を維持しており、また細胞形態や遺伝子発現がヒトES細胞と同様であった。意義:再生医療に向けた免疫応答の無い個人由来多能性幹細胞の作製法として、細胞融合技術の有用性が示された。2. 胚体外組織由来細胞のリプログラミング目的:胚体外組織に由来する細胞を多能性幹細胞へリプログラミングする。内容:ヒト羊膜から樹立した初代培養細胞を、iPS細胞誘導技術を用いてリプログラミングした。リプログラミング後の細胞株はヒトES細胞と同等の多能性関連遺伝子発現、及びテラ、トーマ形成能を示した。意義:リプログラミング対象となる個人由来細胞の供給源として、非侵襲的に入手できる胚体外組織の利用価値を示した。3. 新規細胞融合用デバイスの開発目的:細胞融合を1細胞対1細胞の関係に制御し、かつ互いの核を隔離した状態でリプログラミングを誘導する。内容:細胞核よりも小さな径(1.5mm)の微小孔を介して電気刺激による細胞融合を誘導するデバイスを開発した。GFP蛍光によりリプログラミングを可視化できるマウス体細胞とマウスES細胞とを融合させた結果、融合後も互いの細胞核を隔離した状態を保ち、GFP蛍光が観察された。意義:細胞融合技術により個人用多能性幹細胞を作製する上で障害となる、個人由来細胞へのES細胞核の混入という問題に解決策を示した。

1。通过使用人类胚胎干细胞（ES）细胞融合的细胞融合来重编程人体细胞：将人体细胞重编程为多能的干细胞，使用电刺激细胞融合技术接近人ES细胞。含量：人ES细胞和人类胎儿肺成纤维细胞通过胰蛋白酶化分解为单个细胞，并通过电刺激诱导细胞融合。当在选择性培养条件下对融合细胞进行分类时，融合细胞保持四倍体核型，并且细胞的形态和基因表达与人ES细胞的表达相似。意义：细胞融合技术的有用性已被证明是一种产生来自没有免疫反应再生医学免疫反应的个体的多能干细胞的方法。 2。衍生出源自明确组织的细胞的重新编程：从确定性组织中得出的重编程细胞为多能干细胞。含量：使用IPS细胞诱导技术对从人羊膜建立的原代培养细胞进行了重编程。重新编程后，细胞系显示出相似的多能基因表达，TERA和TOMA形成能力形成TERA和TOMA。意义：我们证明了非侵入性可用的外部组织作为要重编程的个体衍生细胞来源的使用值。 3。开发用于细胞融合的新装置：在单细胞关系中控制细胞融合并在分离每个核的状态下诱导重新编程。内容：我们开发了一种通过直径小于细胞核（1.5 mm）的微孔刺激诱导细胞融合的设备。由于小鼠体细胞之间的融合可以可视化使用GFP荧光重编程，因此观察到融合后的细胞核保持分离，并且观察到GFP荧光。意义：我们已经提出了解决ES细胞核对个体衍生细胞污染问题的解决方案，这是使用细胞融合技术创建个人多能干细胞的障碍。