COP9シグナロソームの新規制御機構の解析:mRNAプロセシングへの関与

COP9信号体的新型调控机制分析：参与mRNA加工

基本信息

批准号：
09J02952
负责人：
安喜史織
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者は、細胞内情報伝達を制御するCOP9シグナロソーム(CSN)の新規制御機構解明を目的として、CSN1サブユニットと、スプライシング機構に関与するSAP130 (spliceosome-associated protein 130)との結合に着目し、モデル植物シロイヌナズナを用いて解析を行っている。SAP130遺伝子の機能がこれまでに十分に解析されていないことから、まず、SAP130 RNAi株を用いて解析を進めた。SAP130プロモーターの活性が特定の時期の花粉で検出されること、またAlexander染色法によりSAP130 RNAi株において花粉の形成に異常が見られることを前年度に報告したので、本年度はさらに花粉に着目した解析を進めた。SAP130 RNAi株の葯を用いて樹脂切片を作製し、トルイジンブルー染色およびDAPI染色を行い、各発達段階における花粉を観察し、SAP130 RNAi株にみられる花粉形成の異常がどの段階から起こるのか特定した。その結果、SAP130 RNAi株のtetrad stage、microspore stageにおける花粉は正常であったが、bicellular stageでは核を失い、萎縮した花粉が見られた。この時期は、SAP130のプロモーター活性が検出される時期と一致する。これらのことから、SAP130遺伝子は花粉形成におけるmicrospore stageからbicellular stageへの移行に必須であると結論づけた。本成果は、国内外の学会において発表され、現在論文を投稿中である。

研究人员一直在使用模型植物拟南芥进行分析，重点是CSN1亚基与SAP130（剪接体相关蛋白130）的结合，该蛋白质与剪接机制有关，目的是阐明COP9信号的新型调节机制（CSN）（CSN），并阐明了调节cop9信号的新调节机制。由于迄今为止尚未对SAP130基因的功能进行充分的分析，因此首先使用SAP130 RNAi菌株进行了分析。我们在上一年报道说，在特定时间在花粉中检测到SAP130启动子的活性，亚历山大染色在SAP130 RNAi菌株中观察到花粉形成异常，因此今年我们进一步进行了针对花粉的分析。使用来自SAP130 RNAi菌株的花药制备树脂切片，并用甲苯胺蓝色和DAPI染色染色，并观察到每个发育阶段的花粉，在哪个阶段发生了在SAP130 RNAI菌株中观察到的花粉形成异常。结果，在SAP130 RNAi菌株的四阶段和小孢子阶段，花粉是正常的，但是在双细胞阶段损失了细胞核，观察到萎缩性花粉。这一时期与检测到SAP130的启动子活性的时期相吻合。从这些发现中，我们得出结论，SAP130基因对于花粉形成期间从微孢子阶段到双细胞阶段至关重要。这些结果已在日本和国外的学术会议上提出，目前正在提交论文。