エゾサンショウウオにおける温度依存的な性決定・性分化機構の解析

虾夷蝾螈温度依赖性性别决定和性别分化机制分析

• 批准号: 09J01941
• 负责人: 宇野 好宣
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01941/
• 关键词: 温度依存性; 性分化関連遺伝子; サンショウウオ; 性染色体; 性判別マーカー; RAPD法; 性分化

性転換個体の遺伝的な性を判別するためのW染色体特異的分子マーカーを作製するため、雌雄個体から抽出したゲノムDNAを20数種類の制限酵素で消化し、電気泳動で検出された雌特異的な反復配列のクローニングを行った。しかし、W染色体特異的分子マーカーを作製することができなかった。そこで、雌雄のゲノムDNAをテンプレートとして使用しランダムプライマーを用いてPCRを行うRAPD解析を行い、アクリルアミドゲルを用いた電気泳動により、メス特異的に検出されたDNAバンドからW特異的なフラグメントのクローニングを試みた。300通りのプライマーの組み合わせを行ったが、この実験でもメス特異的なバンドを検出することができなかった。次に、本研究での発現解析のためにクローニングした、性分化関連遺伝子のサンショウウオホモログの染色体マッピングを行うことで、エゾサンショウウオの性染色体連鎖遺伝子を同定し、その遺伝子のZ染色体連鎖ホモログとW染色体連鎖ホモログの塩基配列を詳細に解析することで、新たな性判別マーカーを作製することができるのではないかと考えた。しかしながら、単離されたすべての性分化関連遺伝子はエゾサンショウウオでは常染色体にマップし、性染色体連鎖遺伝子を同定することができなかった。今後はまだ単離していない性分化関連遺伝子などの機能遺伝子のサンショウウオホモログのクローニング・染色体マッピングを行い、新たな性連鎖遺伝子を同定することで、性判別マーカーの作製を試みている。しかしながら、サンショウウオの染色体標本は非常に難しく、現在の方法では良好な染色体標本を数多く得ることが困難である。したがって、今後は染色体標本作製における細胞培養方法を新たに確立する必要がある。

为了产生W染色体特异性的分子标记，以区分跨性别个体的遗传性别，用20多种类型的限制酶消化了从女性和女性个体中提取的基因组DNA，并克隆了电泳检测到的女性特异性重复序列。但是，不可能产生W染色体特异性分子标记物。因此，使用雌性基因组DNA作为模板和PCR进行了RAPD分析，并使用丙烯酰胺凝胶尝试了雌性特异性DNA带的W特异性片段的克隆。尽管进行了300种不同的引物组合，但在该实验中未检测到女性特异性带。接下来，我们认为，通过在这项研究中以性别差异相关基因的sal虫同源性的染色体映射来表达分析，我们可以确定ezo salamander的性别染色体链接基因，以及分析Z-和W-Wink-n-Wink-n-Wink-n-Wink-Clink semorlogs of thit Gene的基因的基因序列，从而详细构成了性别的性别差异。但是，所有分离性别分化相关的基因均映射到EZO Salamanders中的常染色体，并且无法鉴定性别染色体链接基因。将来，我们试图通过克隆和染色体映射来创建性别歧视标记，并将诸如尚未孤立的性别分化相关基因等功能基因的sal虫同源物进行染色体映射，并识别新的性别链接基因。但是，萨拉曼剂的染色体标本非常困难，很难使用当前方法获得许多好的染色体标本。因此，有必要建立一种新的细胞培养方法来准备将来的染色体标本。