疾患関連TRIMファミリーユビキチンリガーゼ群の網羅的解析

疾病相关TRIM家族泛素连接酶综合分析

基本信息

批准号：
09J01445
负责人：
渡部昌
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01445/
关键词：
ユビキチンリガーゼ PPARγ 3T3-L1 3T3-L1細胞足場非依存性増殖消化管 TRIM31 ユビキチン Src 胃癌癌化

项目摘要

ある種のTRIMファミリーユビキチンリガーゼは、エストロゲン受容体(TRIM25など)、アンドロゲン受容体(TRIM68など)をはじめとした、核内受容体による転写を制御することが知られている。同じく核内受容体スーパーファミリー分子であるPPARγによる転写を制御するTRIMタンパク質を、PPARγ応答配列の下流にホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだレポータープラスミドを用いて、PPARγを導入したHeLa細胞にてルシフェラーゼアッセイを行い検索したところ、複数の候補分子を得た。前年度では、PPARγシグナルを負に制御するあるTRIMタンパク質に注目し解析を進めたが、本年度ではPPARγシグナルを正に制御するTR工Mタンパク質を同定し、解析を進めた。PPARγシグナルの活性化によって成熟化する脂肪前駆細胞である3T3-L1細胞に過剰発現させ分化を誘導すると対照群に比べ有意に分化が促進し、一方安定的にノックダウンさせて分化を誘導すると、対照群に比べ有意に分化が遅延していることを見出した。(1)ノックダウンによりPPARγのリガンド依存性転写活性化能が抑制されること(2)PPARγ発現誘導の開始因子であるC/EBPβとC/EBPδの発現には大きな変動はなく、PPARγが正のフィードバック機構により自律的に発現を上昇させる第4日目以降にPPARγ発現量に大きな差が開くこと(3)過剰発現3T3-L1細胞にて、PPARγリガンド存在下で特に分化誘導が促進されていたこと(4)分化誘導剤の1つであるdexamethasoneによるGRの転写活性に対し影響を与えないことなどを踏まえると、ノックダウンによる脂肪細胞分化の抑制は、PPARγの転写活性が減弱したことに依ることを強く示唆していた。

已知某些TRIM家族泛素连接酶通过核受体调节转录，包括雌激素受体（TRIM25等）和雄激素受体（TRIM68等）。 TRIM 蛋白也控制 PPARγ（一种核受体超家族分子）的转录，该蛋白被用于在转染 PPARγ 的 HeLa 细胞中进行荧光素酶测定，使用报告质粒，该报告质粒在 PPARγ 反应元件下游插入了萤火虫荧光素酶基因。多个候选分子。去年，我们重点分析了一个负调节PPARγ信号的TRIM蛋白，但今年我们鉴定并分析了一个正调节PPARγ信号的TRIM蛋白。当在 3T3-L1 细胞（通过 PPARγ 信号激活而成熟的前脂肪细胞）中过表达并诱导分化时，与对照组相比，分化显着促进，而当通过稳定敲低诱导时，我们发现与对照组相比，分化显着延迟。对照组。 (1) PPARγ的配体依赖性转录激活能力被敲低所抑制。 (2) PPARγ表达诱导的起始因子C/EBPβ和C/EBPδ的表达没有显着变化，并且PPARγ是PPARγ的表达诱导因子。第4天后，PPARγ的表达水平出现较大差异，此时表达通过（3）过表达的反馈机制自主增加考虑到在 PPARγ 配体存在的情况下，3T3-L1 细胞中的分化诱导得到特别促进 (4)，并且分化诱导剂之一地塞米松对 GR 转录活性没有影响，强烈表明脂肪细胞受到抑制。通过敲低产生的分化是由于 PPARγ 转录活性的减弱。