ウイルス様中空粒子(VLP)を用いた経口ワクチンの開発

使用病毒样空心颗粒（VLP）开发口服疫苗

• 批准号: 13226041
• 负责人: 保富 康宏
• 金额: --
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226041/
• 关键词: HIV; CTL; 粘膜免疫; 経口ワクチン

HEVのORF2のN末、C末および4ヵ所の疎水性領域にHSVのB cellエピトープを挿入したバキュロウイルスを作成し、VLPの形成および挿入エピトープの発現を見たところN末、C末および2カ所疎水性領域にてVLPの形成と挿入エピトープの発現が認められた。VLP形成量のもっとも多いC末に挿入したchimeric VLPをマウスに経口投与したところ血清中および消化管粘液中に挿入エピトープ特異的抗体の誘導が認められた。これらのことより上述の部位にHIVenvの中和活性とCTLのエピトープであるP18(RIRGPGRAFTIGK)を挿入したchimeric VLP(VLP-HIV)を作成した.このVLP-HIVをマウスに経口投与すると血清中にはIgGが、糞便中にはIgGとIgAがエピトープ特異的に産制が認められた。これらマウスにHIV組み込みワクシニアウイルスを腹腔内、直腸内または膣内に接種したところ腹腔内投与では血清中IgGが、直腸内および膣内投与では各部位の洗浄液からIgAが挿入エピトープ特異的に産制されていた。更に挿入エピトープに対する細胞傷害性Tリンパ球(CTL)の誘導を検討したところ肺細胞のみならず、腸間膜リンパ節およびバイエル板細胞からも誘導が認められた。これら免疫マウスにHIV遺伝子組み込みワクシニアウイルスを接種し、卵巣からワクシニアウイルスをReal Time PCRにてウイルスコピー数を測定したところHIV-VLP投与マウスでは著しいコピー数の低下が認められた。以上のことから経口感染をするHEVのVLPを用いたVLP-HIVは全身的にも粘膜面にもエピトープ特異的免疫が液性免疫のみならず細胞性免疫をも誘導することが示された。

我们构建了将HSV B细胞表位插入HEV的N端、C端和ORF2的四个疏水区的杆状病毒，并观察VLP的形成和插入表位的表达。在几个疏水区域观察到表位。当将嵌合VLP插入C末端（VLP形成量最高）给小鼠口服时，在血清和胃肠粘液中诱导出针对插入表位的特异性抗体。基于这些发现，我们创建了一种嵌合VLP（VLP-HIV），其中HIVenv中和活性和CTL表位P18（RIRGPGRAFTIGK）被插入到上述位点。当这种VLP-HIV口服给小鼠时，发现在小鼠的粪便中观察到表位特异性的 IgG 和 IgA 产生。当这些小鼠腹腔内、直肠内或阴道内接种HIV整合痘苗病毒时，腹腔内给药时在血清中检测到IgG，而腹腔内和阴道内给药时从各部位的灌洗液中检测到IgA。此外，当我们检查针对插入表位的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的诱导时，我们观察到不仅来自肺细胞，而且来自肠系膜淋巴结和拜尔氏补片细胞的诱导。这些免疫小鼠接种了整合了HIV基因的痘苗病毒，通过实时PCR测量来自卵巢的痘苗病毒的病毒拷贝数，观察到HIV-VLP-拷贝数显着下降。给予小鼠。上述结果表明，使用可经口传播的HEV VLP的VLP-HIV不仅可诱导体液免疫，还可通过全身和粘膜表面的表位特异性免疫诱导细胞介导的免疫。

项目成果

Niikura, M., et al.: "Chimeric recombinant hepatitis E virus-like particles as an oral vaccine vehicle presenting foreign epitopes"Virology. (印刷中).

Niikura，M.，等人：“嵌合重组戊型肝炎病毒样颗粒作为呈现外来表位的口服疫苗载体”病毒学（正在出版）。

Kuromatsu, I., et al.: "Induction of effective antitumor immune responses by using DNA of an α Ag from mycobactcria"Cancer Gene Ther. 8. 483-490 (2001)

Kuromatsu，I.，等人：“通过使用来自分枝杆菌的 α Ag 的 DNA 诱导有效的抗肿瘤免疫反应”Cancer Gene Ther. 8. 483-490 (2001)

Iwanami, N., et al.: "Role of natural killer cells in resistance against Friend retrovirus-induced leikemia"J. Virol. 75. 3152-3163 (2001)

Iwanami, N. 等人：“自然杀伤细胞在抵抗 Friend 逆转录病毒诱导的白血病中的作用”J.

Mori, K., et al.: "Quintiple deglycosylated mutant of simian immunodeficiency virus SIVmac239 in rhesus macaques : Robust primary replication, tightly contained・・・"J.Virol. 75. 4023-4028 (2001)

Mori, K., 等人：“恒河猴中猿猴免疫缺陷病毒 SIVmac239 的五重去糖基化突变体：稳健的初级复制，紧密包含......”J.Virol. 75. 4023-4028 (2001)

Uno-Furuta, S., et al.: "Induction of virus-specific cytotoxic T lymphocytes by in vivo electric dministration of peptides"Vaccine. 19. 2190-2196 (2001)

Uno-Furuta，S.等人：“通过体内肽的电施用诱导病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞”疫苗。