Biochemical analysis of the AGO-siRNA complex about DNA binding activity to induce the TGS (Transcriptional Gene Silencing).

对 AGO-siRNA 复合物的 DNA 结合活性进行生化分析，以诱导 TGS（转录基因沉默）。

• 批准号: 21570178
• 负责人: ISHIDA Takaomi
• 金额: $ 3.08万
• 依托单位: The University of Tokyo (2010-2011)Waseda University (2009)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21570178/
• 关键词: 転写; TGS; Gene Silencing; Argonaute; epigenetics; siRNA; アルゴノート; 転写調節; gene silencing; HIV

Our research group previously published data demonstrate that of siRNA targeting conserved regions of the untranscribed HIV-1 promoter region, a single dose of either Prom A siRNA induced prolonged and profound suppression of HIV re-production. Definitive evidence of transcriptional silencing (TGS) was provided to this repression of HIV reproduction by several assays. There is accumulating evidence the Argonaute family of siRNA binding proteins, play a pivotal role in siRNA induced TGS. In TGS Ago1 protein accumulates at the site of initiation of silencing. To explore the role of Ago1 in siRNA induced TGS of HIV-1, in vitro binding assay was established for detecting AGO1-siRNA complex can be bind to target DNA. This assay system clearly demonstrated that these complex canb ebind directly to taget DNA sequence. AGO1 protein was co-localized with siRNA when the cells infected HIV-1 by immune-staining assay. We also demonstrated that these TGS effects are dependent upon close matching between the siRNA and the target sequence.

我们的研究小组之前发表的数据表明，针对非转录HIV-1启动子区域的保守区域的siRNA，单剂量的Prom A siRNA可诱导对HIV复制的长期而深刻的抑制。通过多项检测提供了转录沉默（TGS）确实抑制 HIV 繁殖的证据。越来越多的证据表明，Argonaute siRNA 结合蛋白家族在 siRNA 诱导的 TGS 中发挥着关键作用。在 TGS 中，Ago1 蛋白在沉默起始位点积聚。为了探讨Ago1在siRNA诱导HIV-1 TGS中的作用，建立了体外结合实验来检测AGO1-siRNA复合物能否与靶DNA结合。该测定系统清楚地证明这些复合物可以直接与目标DNA序列结合。通过免疫染色检测，当细胞感染HIV-1时，AGO1蛋白与siRNA共定位。我们还证明这些 TGS 效应取决于 siRNA 和靶序列之间的紧密匹配。

项目成果

HIV-1 由来 antisense RNA によるウイルス複製抑制メカニス〓 ムの解析

HIV-1反义RNA抑制病毒复制的机制分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 小林(石原)美栄; 山岸誠; 松田有加; 中野和民; 矢持忠徳; 石田尚臣 ;渡邉俊樹
• 通讯作者: 渡邉俊樹

Kelleher and Toshiki Watanabe The Epigenetic Regulation of HIV-1 Virus Gene Expression.

Kelleher 和 Toshiki Watanabe HIV-1 病毒基因表达的表观遗传调控。

• 发表时间: 2012
• 作者: Takaomi Ishida;Kazuo Suzuki;Makoto Yamagishi;Ariko Miyake;David A Cooper;Anthony D.
• 通讯作者: Anthony D.

HIV-1にコードする antisonse RNAの新規探索と機能解析

HIV-1编码的反义RNA的新颖搜索和功能分析

• 发表时间: 2009
• 作者: 小林美栄;原拓馬;山岸誠;三宅在子;石田尚臣;渡邉俊樹
• 通讯作者: 渡邉俊樹

HIV-1-encoded antisense RNA suppresses viral replication for a prolonged period.

• DOI: 10.1186/1742-4690-9-38
• 发表时间: 2012-05-08
• 期刊: Retrovirology
• 影响因子: 3.3
• 作者: Kobayashi-Ishihara M;Yamagishi M;Hara T;Matsuda Y;Takahashi R;Miyake A;Nakano K;Yamochi T;Ishida T;Watanabe T
• 通讯作者: Watanabe T

Kelleher and Toshiki Watanabe.The epigenetic regulation of HIV-1 virus gene expression

Kelleher 和 Toshiki Watanabe. HIV-1 病毒基因表达的表观遗传调控

• 发表时间: 2012
• 作者: Takaomi Ishida;Kazuo Suzuki;Makoto Yamagishi;Ariko Miyake;David A Cooper;Anthony D.
• 通讯作者: Anthony D.