外傷歯の歯髄再生療法の基盤となる歯髄細胞の分化誘導法の確立

牙髓细胞诱导分化方法的建立，为外伤牙牙髓再生治疗奠定基础

基本信息

批准号：
20659296
负责人：
大島勇人
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】歯の損傷後の歯髄治癒過程における象牙芽細胞分化機構ならびに胎生期ラベリング法によりマウス歯髄組織幹細胞をブロモデオキシウリジン(BrdU)によりラベルし、歯髄におけるBrdU label-retaining cells(LRCs)の分化能を解明することを目的に、歯の移植後の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)およびオステオポンチン(OPN)の反応、LRCsの分化能を免疫細胞化学的に検索した。【方法】妊娠後期ICRマウスに3～4日間BrdUを腹腔内投与し、生後3週後に深麻酔下で上顎第一臼歯抜去後に歯冠部を舌下部へ他家移植した。術後1日～2週後にアルデヒド系固定液で灌流固定し、EDTA脱灰後、パラフィン切片を作製し、抗GM-CSF・抗OPN・抗ネスチン抗体・抗BrdU鼎を用いた免疫染色を行った。なお無処置群の左側臼歯を対照群とした。【結果と考察】対照群歯髄では、歯髄中央部血管周囲にLRCsが局在し、咬頭頂領域を中心に歯髄・象牙質界面に弱いオズテオポンチン陽性反応が見られ、象牙芽細胞はネスチン強陽性を示したが、歯髄内はGM-CSFは陰性であった。術後に歯髄のネスチン免疫陽性反応が消失したが、3～7日後に、GM-CSF陽性細胞、OPN陽性細胞の出現に引き続き、ネスチン陽性象牙芽細胞様細胞が歯髄・象牙質界面に再配列した。14日後には歯髄腔に骨組織形成が惹起されたが、骨芽細胞がOPN陽性反応を示した。GM-CSF陽性反応産物は象牙細管内にも見られ、既存の象牙質と再生象牙質の界面にOPN陽性反応が観察された。さらに、in situ hybridizationによりOPN遺伝子発現を検索ると、免疫反応とほぼ同じ発現パターンを示した。また、LRCsは再生象牙芽細胞にコミットされていた。以上より、歯の移植後の歯髄治癒過程における象牙芽細胞の分化には、GM-CSF発現とOPN発現が重要な役割を果たし、LRCsが象牙芽細胞に分化することが明らかとなった。

目的：通过胚胎标记，用溴脱氧尿苷（BRDU）标记牙齿损伤和小鼠果肉组织的干细胞在牙髓愈合过程和小鼠果肉组织的干细胞过程中的机制，而BrdU标记细胞（LRC）在果肉中搜索的brdU标记细胞（LRC）的分化潜力是对果态的响应，以响应于果实的响应，以响应菌群的响应，以响应菌丝。牙齿植入后（GM-CSF）和骨桥蛋白（OPN），以及LRC的分化潜力。 [方法] BRDU被腹膜内对晚期ICR小鼠腹膜内治疗3至4天，在3周龄后，将牙冠移植到深度麻醉下的第一个上颌磨牙后，将牙冠移植到舌下区域。手术后一到两周，将患者灌注并用醛固定剂固定，在EDTA脱钙后，使用抗GM-CSF，抗OPN，抗替替汀抗体和抗Brdu ding制备了石蜡切片并进行免疫染色。未经处理的组的左磨牙用作对照组。 [结果和讨论]在对照组中，LRC位于中央纸浆中的血管周围，并且在牙髓丁丁蛋白界面上观察到弱卵桥蛋白反应，以底层为中心，而牙糖母细胞显示强巢蛋白阳性，但果肉中GM-CSF为阴性。手术后，果肉中的巢蛋白免疫反应消失了，但是3-7天后，在GM-CSF和OPN阳性细胞出现后，巢蛋白阳性的Odontoblast样细胞在纸浆底丁蛋白界面上重新排列。 14天后，在纸浆腔中诱导骨组织形成，但成骨细胞显示阳性OPN反应。在牙本质管中还发现了GM-CSF阳性反应产物，并且在现有牙本质和再生牙本质之间的界面上观察到OPN阳性反应。此外，通过原位杂交搜索OPN基因表达的表达与免疫反应几乎相同。此外，LRC被承诺用于再生的Odontoblasts。从上面可以看出，GM-CSF和OPN表达在牙齿植入后的牙髓愈合过程中的分化中起重要作用，而LRC则分化为odontotoblasts。