消化器癌におけるメチル化を指標とした治療法の開発

以甲基化为指标的胃肠癌治疗方法的开发

基本信息

批准号：
00J61001
负责人：
鈴木拓
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J61001/
关键词：
大腸癌 DNAメチル化マイクロアレイ DAC TSA SFRP1

项目摘要

これまで大腸癌、胃癌、乳癌、肺癌、白血病など、様々な悪性新生物疾患において、癌抑制遺伝子の高メチル化による不活化が報告されている。我々はマイクロアレイ法を用いて、脱メチル化剤5-aza-2' deoxycytidine(以下DAC)とヒストン脱アセチル化阻害剤Trichostatin A(以下TSA)の組み合わせがヒト大腸癌細胞に及ぼす影響を解析し、高メチル化により不活化されている遺伝子を網羅的に解析した。これまでに低濃度DACおよびTSAの組み合わせ処理により発現上昇する遺伝子を約70個同定し、RT-PCR法で薬剤処理による発現の変化を確認した。この結果、これらの遺伝子群は、その発現パターンから2通りに分類できることが分かった。低濃度DAC処理単独にて弱い発現上昇が見られ、DAC+TSA処理にてさらに発現上昇するが、TSA単独処理では発現に変化を認めないgroup 1と、TSA単独処理によって発現誘導されうるgroup 2である。Group 1遺伝子群の発現回復パターンは、既知のメチル化遺伝子と類似することから、高メチル化がそれら遺伝子の不活化に関与すると推測される。事実、我々は、group 1遺伝子上流のCpG islandをデータベース検索から同定し、その高メチル化を確認している。これに対し、group 2遺伝子群は、我々の上流にCpG islandを有しても、メチル化が認められず、TSAによる発現上昇は従来知られている高メチル化とは別なメカニズムと考えられる。Group 1遺伝子群の中には、染色体部位やこれまで報告されている機能から、新たなtumor suppressorである可能性の考えられるものが複数含まれている。中でも、分泌型frizzled関連蛋白1型(SFRP1)は、大腸癌の癌化に重要なWNT経路を抑制する働きを有しており、機能解析の結果、SFRP1のメチル化による不活化は癌抑制遺伝子APCや、癌遺伝子β-cateninの突然変異と並び、大腸発癌において重要な役割を果たしていることを突き止め、現在さらに解析を進めている。

据报道，在多种恶性肿瘤疾病中，例如结肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌和白血病，肿瘤抑制基因因高甲基化而失活。我们采用微阵列方法分析了去甲基化剂5-aza-2'脱氧胞苷（以下简称DAC）与组蛋白脱乙酰化抑制剂曲古抑菌素A（以下简称TSA）联用对人结直肠癌细胞的影响。我们全面分析了因高甲基化而失活的基因。迄今为止，我们已经鉴定出大约 70 个基因，其表达通过低浓度 DAC 和 TSA 的联合治疗而增加，并使用 RT-PCR 确认了由于药物治疗而导致的表达变化。结果表明，这些基因组根据其表达模式可以分为两类。单独用低浓度DAC处理时观察到表达有微弱的增加，当用DAC+TSA处理时表达进一步增加，但单独用TSA处理时表达没有变化，组1和组2表达可以是通过单独使用 TSA 治疗来诱导的。由于第1组基因的表达恢复模式与已知的甲基化基因相似，因此推测高甲基化与这些基因的失活有关。事实上，我们通过数据库搜索在第 1 组基因上游发现了一个 CpG 岛，并证实了其高甲基化。另一方面，第 2 组基因虽然在我们上游有一个 CpG 岛，但并未甲基化，并且 TSA 引起的表达增加被认为是由于与先前已知的高甲基化不同的机制。第 1 组基因包括多个基因，根据其染色体位置和先前报道的功能，这些基因可能是新的肿瘤抑制因子。其中，分泌型卷曲相关蛋白1型（SFRP1）具有抑制WNT通路的功能，这对于结直肠癌的发生具有重要作用。功能分析表明，SFRP1通过甲基化失活是一种抑癌基因。研究表明，这与 APC 和癌基因 β-catenin 的突变一起在结直肠癌发生中发挥着重要作用，目前正在进行进一步分析。

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Toyota M, Itoh F, Kikuchi T, Satoh A, Obata T, Suzuki H, Toyota M, Itoh F, Kikuchi T, Satoh A, Obata T, Suzuki H, Tokino T, Imai K.: "DNA methylation changes in gastrointestinal disease"Journal of Gastroentelogy. 37 suppl 14. 97-101 (2002)

Toyota M、Itoh F、Kikuchi T、Satoh A、Obata T、Suzuki H、Toyota M、Itoh F、Kikuchi T、Satoh A、Obata T、Suzuki H、Tokino T、Imai K.：“胃肠道疾病中的 DNA 甲基化变化

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Satoh A, Toyota M, Itoh F, Obata T, Sasaki Y, Suzuki H, Yawata A, Kusano M, Fujita M, Tokino T, Imai K.: "DNA methylation and histone deacetylation associated with silencing DAP kinase gene expression in colorectal and gastric cancers"British Journal of C

Satoh A、Toyota M、Itoh F、Obata T、Sasaki Y、Suzuki H、Yawata A、Kusano M、Fujita M、Tokino T、Imai K.：“DNA 甲基化和组蛋白脱乙酰化与结直肠和直肠癌中 DAP 激酶基因表达沉默相关

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Kikuchi T, Toyota M, Itoh F, Suzuki H, Obata T, Kakiuchi H, Kusano M, Issa JP, Tokino T, Imai K.: "Inactivation of p57KIP2 by regional promoter hypermethylation and histone deacetylation in human tumors"Oncogene. 21巻17号. 2741-2749 (2002)

Kikuchi T、Toyota M、Itoh F、Suzuki H、Obata T、Kakiuchi H、Kusano M、Issa JP、Tokino T、Imai K.：“人类肿瘤中区域启动子高甲基化和组蛋白脱乙酰化导致的 p57KIP2 失活”Oncogene 21 No。 17. 2741-2749 (2002)