サイトカインによる細胞増殖シグナル伝達機構の研究

细胞因子对细胞增殖信号转导机制的研究

基本信息

批准号：
11670313
负责人：
藤井穂高
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11670313/
关键词：
サイトカイン Yeast Two Hybrid法インターロイキン Pyk2PTK

项目摘要

本研究は、分子生物学的方法を用いて、サイトカイン受容体からのシグナル伝達に関与する分子群を同定し、それらの分子群がサイトカインの作用発現に果たす役割を解明することを目的としている。これまでの研究によって、サイトカイン受容体からのシグナル伝達にはJakファミリー蛋白チロシンキナーゼ(PTK)が、重要な役割を果たしていることが知られている。Jak PTKの基質となる分子、あるいはJak PTKの機能を調節する分子の同定を目的として、Yeast Two Hybrid法を用いてJak PTKと結合する分子の同定・単離を進める。平成11年までに、この方法を用いて、Jak3 PTKと会合する785アミノ酸からなる新規分子の同定に既に成功した。この分子を、インターロイキン2(IL-2)やIL-3依存性に増殖する各種細胞株に一過性に発現させ、増殖に伴って発現が誘導される遺伝子のプロモーターに与える影響を検討したところ、この新規分子はこれらの遺伝子の発現を負に制御する可能性が示唆された。現在までに、この分子をテトラサイクリン誘導性に発現するような細胞株の樹立に成功しており、この分子の発現によるIL-2及びIL-3依存性増殖への影響を解析中である。また、この分子の遺伝子を欠損するような変異マウスの作製も計画している。一方、既知の分子に関して、サイトカイン受容体からのシグナル伝達への関与を検討した結果、従来ストレス応答等で活性化されることが示されていたPyk2PTKが、IL-2及びインターフェロンγシグナルにおいて重要な役割を果たしていることを見い出した。

本研究的目的是利用分子生物学方法鉴定参与细胞因子受体信号转导的分子基团，并阐明这些分子基团在细胞因子作用表达中所起的作用。先前的研究表明，Jak家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）在细胞因子受体的信号转导中发挥重要作用。为了鉴定作为 Jak PTK 底物的分子或调节 Jak PTK 功能的分子，我们将使用酵母二杂交方法来鉴定和分离与 Jak PTK 结合的分子。到 1999 年，这种方法已被用来成功鉴定出一种由 785 个氨基酸组成的与 Jak3 PTK 相关的新分子。我们在以白细胞介素 2 (IL-2) 和 IL-3 依赖性方式增殖的各种细胞系中瞬时表达该分子，并检查了其对随增殖诱导表达的基因启动子的影响。这种新分子可能会负面调节这些基因的表达。迄今为止，我们已经成功建立了以四环素诱导方式表达该分子的细胞系，目前正在分析该分子的表达对IL-2和IL-3依赖性增殖的影响。他们还计划培育缺乏这种分子基因的突变小鼠。另一方面，通过检查已知分子参与细胞因子受体信号转导的情况，我们发现在应激反应中被激活的 Pyk2PTK 在 IL-2 和干扰素 γ I 信号中发挥着重要作用。发现它发挥了作用。