再構成in vitro翻訳系を利用したCCTの新生アクチン折れたたみ機構解明

使用重建的体外翻译系统阐明 CCT 中新生肌动蛋白的折叠机制

基本信息

批准号：
08J11078
负责人：
鮫島知哉
金额：
$ 0.77万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J11078/
关键词：
シャペロニンフォールディング in vitro翻訳アクチン GroEL GroES フォールデイング

项目摘要

真核生物のシャペロニンであるCCTは、最近になるまで発現系が構築されていなかったことや反応機構の複雑さから、大腸菌のシャペロニンGroELに比べて解析が遅れている。そのため、CCTの機能に関しては未だ不明な点が多い。CCTは翻訳途中のタンパク質とも相互作用することが知られており、生体内におけるCCTの機能を調べるには、リボソームから翻訳されている途中の「新生」タンパク質に対する折れたたみ活性を調べることが重要である。そこで本研究では翻訳系のみを再構成した系にCCTを添加し、その折れたたみ活性を調べる実験系を構築すること目的とした。αアクチンDNAおよびCCTをPURESYSTEM中に添加することでアクチンのin vitro合成を行った。合成したアクチンの重合活性、ミオシンとの相互作用活性を調べた結果、本実験系を利用してアクチンが正しい立体構造に折れたたまれる様子を確認することが出来ることがわかった。並行して、本年度は原核生物のシャペロニンであるGroELの機能解析も合わせて行った。昨年度までに私は、従来のGroELの反応モデルでは存在しないといわれていた、GroEL1分子にGroESが2分子結合した状態(football型複合体)が存在することを発見している(Sameshima et al.,J.Biol.Chem.2008)。本年度は溶液中の変性タンパク質がfootball型複合体の形成に与える影響について解析した。その結果、変性タンパク質がfootball型複合体の形成を促進すること、およびそのメカニズムを見出した(Sameshima et al.,Biochem.J.,2010)。さらに、GroEL-GroESの相互作用を1分子蛍光イメージングする実験も合わせて行ったところ、従来のモデルとは異なる新たなGroELの反応メカニズムが明らかになった。

CCT是一种护士生物CCT，由于缺乏表达和反应机理的复杂性，与大肠杆菌的spriperonin凹槽相比，已经延迟了。因此，CCT函数中仍然有许多未知点。众所周知，CCT在翻译过程中也与蛋白质相互作用，重要的是检查中间翻译的“新”蛋白的折叠活性。因此，在这项研究中，目的是建立一个实验系统，将CCT添加到重建的系统中，该系统仅重建翻译系统并检查折叠活动。肌动蛋白的体外是通过将α肌动蛋白DNA和CCT添加到纯系统中进行的。由于检查合成肌动蛋白的聚合活性以及与肌球蛋白的相互作用活性，因此发现该实验系统可以证实肌动蛋白被分解为正确的三维结构。同时，今年还进行了凹槽的功能分析，一种原代生物伴侣蛋白。到去年，我发现存在一个状态，其中存在Groes（足球型综合体）（足球型综合体），据说在传统的凹槽反应模型中不存在。。今年，我们分析了退化蛋白在溶液中对足球型复合体形成的影响。结果，退化的蛋白质促进了足球型配合物和机制的形成（Sameshima等，Biochem.J。，2010）。另外，一个实验，其中一种分子荧光与凹槽 - 胶质的相互作用成像的实验显示了一种与常规模型不同的新的凹槽反应机制。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

文部科学省科学研究費補助金特定領域研究タンパク質の社会〜機能発現と秩序維持〜

文部科学省科学研究特定领域研究补助金蛋白质学会～功能表达与秩序维持～

DOI：
发表时间：
期刊：
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0
作者：
通讯作者：

SINGLE-MOLECULE IMAGING OF 1 : 2 GROEL-GROES COMPLEXES IN ZERO-MODE WAVEGUIDES

零模波导中 1 : 2 GROEL-GROES 复合物的单分子成像

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
Tomoya Sameshima;Taro Ueno;Junichi Wada;Ryo Iizuka;Mutsuko Aoki;Naonobu Shimamoto;Iwao Ohdomari;Takashi Tanii;Takashi Funatsu
通讯作者：
Takashi Funatsu

変性タンパク質がGroEL-GroES football 型複合体の形成を促進する

变性蛋白质促进 GroEL-GroES 足球型复合物的形成

DOI：
发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
0
作者：
餃島知哉;飯塚怜;上野太郎;船津高志
通讯作者：
船津高志

JBC papers of the week

JBC 本周论文

DOI：
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期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

GroEL-GroES相互作用に与える変性タンパク質の影響

变性蛋白质对 GroEL-GroES 相互作用的影响

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
鮫島知哉;飯塚怜;上野太郎;船津高志
通讯作者：
船津高志

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