単細胞動物ミドリゾウリムシと緑藻クロレラとの細胞内共生成立機構の研究

单细胞动物草履虫与绿藻小球藻细胞内共生形成机制研究

基本信息

批准号：
08J00334
负责人：
児玉有紀
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Yamaguchi University (2009)University of Tsukuba (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)ミドリゾウリムシの共生クロレラは1つずつが宿主の食胞膜由来のペリアルガルバキュオール(PV)膜に包まれている。我々はミドリゾウリムシをタンパク質合成阻害剤のシクロヘキシミドで処理して光学顕微鏡で観察すると、24時間以内に共生クロレラを包むPV膜が同調して膨張し、次にリソソーム融合阻止能力を失い、PV膜内のクロレラの消化が誘導される現象を発見した。(Kodama and Fujishima, 2008)。しかし、シクロヘキシミド処理によって誘導される一連の変化を透過型電子顕微鏡で観察した結果、PV膜の膨潤とリソソームの融合が誘導される以前にクロレラの内部構造はすでに崩壊していることが分かった。さらに、他のタンパク質合成阻害剤(エメチン、ピューロマイシン、クロラムフェニコール)で処理した場合には、上記の現象は誘導されないことを明らかにした(投稿準備中)。(2)ミドリゾウリムシとクロレラの細胞内共生には、トリコシストが多数存在する宿主細胞表層直下へのクロレラの接着が必要である。トリコシストに対するモノクローナル抗体を作製し、クロレラの再共生と除去に伴うトリコシストの変化を間接蛍光抗体法で調べた。その結果、クロレラの再共生過程では表層直下のトリコシストをクロレラが押しよけて再配列させ、トリコシストの総数も減少することが明らかになった。逆にクロレラを除去すると、クロレラ数の減少に伴いトリコシスト数が増加した。これらの結果は、共生クロレラがトリコシスト数やその配置を変化させることを示唆している(投稿準備中)。

（1）甲虫中的共生小球藻之一包裹在源自宿主的吞噬膜的周围galbacuol（PV）膜中。我们发现，甲虫用蛋白质合成抑制剂环己酰胺处理，并在光学显微镜下观察到，在24小时内，PV膜封闭了共生的小球藻在同步中膨胀，扩展，然后扩展，然后阻断溶酶体融合的能力，从而阻止了溶酶体的消化力，从而导致了PV Membrane Membrane。（Kodama和Fujishima，2008年）。但是，当我们观察到使用透射电子显微镜通过环己酰胺处理引起的一系列变化时，发现小球藻的内部结构在PV膜和溶酶体融合肿胀之前已经崩溃了。此外，揭示了上述现象在用其他蛋白质合成抑制剂（Emetine，嘌呤霉素，氯霉素）（准备发布）时，未诱导上述现象。（2）在宿主细胞的表面下方，在许多毛细血管细胞的表面下方，细胞内的细胞内共生需要对小球藻的粘附。制备了针对三核细胞的单克隆抗体，并通过间接荧光免疫荧光法检查了伴有再伴生物的三核细胞和切除小球藻的变化。结果，据揭示了在小球藻的复兴过程中，小球藻将表面正下方的毛囊推开并重新排列它们，而三核细胞的总数也减少了。相反，当去除小球藻时，毛囊肿的数量随小球藻数量的减少而增加。这些结果表明，共生的小球藻会改变毛囊的数量及其位置（准备发布）。