キャピラリー電気泳動によるドキソルビシン誘導DNA断片化の定量的評価

通过毛细管电泳定量评估阿霉素诱导的 DNA 断裂

基本信息

批准号：
08F08035
负责人：
今坂藤太郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年度は、20mMのタウロデオキシコール酸と2%の2-ヒドロキシプロピル-γ-シクロデキストリンを含むホウ酸緩衝溶液(60mM、pH9.3)を泳動溶液として用いることで、2種のアントラサイクリン系抗がん剤を20分以内で分離できることを明らかにした。平成21年度には、この方法を4種の抗がん剤に適用した。同様の泳動溶液を用いて、アントラサイクリン系の抗がん剤であるドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ドウノルビシンの分離を達成することができた。昨年度の研究結果から、アントラサイクリン系の抗がん剤は、4時間程度まで細胞内に蓄積されるが、その後、膜タンパク質であるp-糖タンパク質(MDR)と多剤耐性関連タンパク質(MRP)により細胞外に放出されることがわかった。そこで、p-糖タンパク質の阻害剤であるサイクロスポリンA、ベラパミル、プロビニシッドで細胞を処理し、細胞内に抗がん剤を蓄積できるかどうかを検討した。その結果、ベラパミルを単独で用いた場合に、細胞内への抗がん剤の蓄積が顕著であることを発見した。また、その蓄積挙動は抗がん剤の種類によっても異なっていた。ベラパミルはMDRを阻害し、プロビニシッドはMRPを阻害することが知られている。したがって、本研究で得られた結果は、研究で用いた細胞(RDES)では、MRPよりもMDRがより多く発現していることを示唆するものである。したがって、開発した分離分析法は、細胞内に取り込まれた複数の抗がん剤を同時に計測できるとともに、多剤耐性に関連するタンパク質の阻害剤の効能評価にも応用できることが明らかとなった。

去年，据透露，通过使用含有20 mM牛陶羟基胆酸和2％2％2-羟基丙基 - γ-cycledextrin作为运行溶液，可以在不到20分钟的时间内分离两种蒽环类药物。 2009年，该方法应用于四种类型的抗癌药物。使用相同类型的运行溶液，可以分离基于蒽环类药物的抗癌药，阿霉素，表柔脂素，伊达比霉素和唐曲皮蛋白。去年的研究结果表明，基于蒽环类药物的抗癌药物会在细胞内积累约4个小时，但随后通过膜蛋白P-糖蛋白（MDR）和多药耐药相关蛋白（MRP）在细胞外释放。因此，我们检查了细胞是否可以用Cyclosporin A，Verapamil和Provinicid治疗，它们是P-糖蛋白的抑制剂，以及是否可以在细胞中积聚抗癌剂。结果，已经发现，当单独使用维拉帕米时，抗癌剂在细胞内的积累非常重要。积累行为也取决于抗癌药物的类型。已知Verapamil抑制MDR，并抑制MRP。因此，本研究获得的结果表明，研究中使用的细胞（RDES）比MRP表达更多的MDR。因此，已经揭示了开发的分离分析方法可以同时测量掺入细胞中的多种抗癌剂，也可以应用于评估与多药耐药性相关的蛋白质抑制剂的疗效。