短期的電気刺激による無細胞化神経への端側神経縫合を用いたシュワン細胞付加の可能性

使用端到端神经缝合线通过短期电刺激将雪旺细胞添加到无细胞神经的可能性

基本信息

批准号：
17K11550
负责人：
吉澤秀和
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は幼弱化シュワン細胞が蛍光発色するnestin-GFP mouse を保有し用いることで、Donor 神経に少なくとも軽微な損傷を加えることで多くのシュワン細胞の遊走が無細胞化神経内に観察され、特に移植神経の両側端をDonor 神経へ端側神経縫合を行なった群でさらに豊富なシュワン細胞が短期間に遊走し移植神経全域へ充填することに成功し2016年に報告した。当施設の遺伝子組み換え動物の研究施設の改修工事が行われることとなり、上記モデルが作成困難な状況となった。そのため、一度繁殖していたマウスを凍結受精卵の状態にする必要に迫られた。また、時期を同じく他施設へ出向となったため、凍結受精卵を孵化させ出向先にて遺伝子改変マウスを飼育する手続きが完了し、元の施設で孵化させ出向先に搬入し研究を開始した。GFP-positiveのmouseの繁殖に時間を要したが、直径１mmのリナーブをDonor神経に端側縫合するモデル作成を開始した。長さを10mm程度として端側縫合モデルの作成を行ったが、リナーブの柔軟性が乏しく両側端を端側縫合することは困難であった。また、繁殖されたGFP-posivite mouseの大腿神経の大きさも細いものが多く、柔軟性の乏しいリナーブとの神経縫合が困難であった。片端を端側神経縫合したモデルを前実験モデルとして数匹作成し、Live imagingでの蛍光発色を確認したが、発色が確認できなかった。さらに、出向先の遺伝子組み換え動物の研究施設の改修工事が決定し、マウスの飼育の継続が困難となった。遺伝子組み換え動物をLive imaging技術を用いて経時的に観察し、シュワン細胞の遊走を観察しているため、相次いでモデル作成の継続困難な状況のため、モデル作成の段階で継続ができない状況が続いた。

通过使用婴儿施万细胞发出荧光的巢蛋白-GFP小鼠，我们观察到，通过对供体神经施加至少轻微的损伤，许多施万细胞迁移到无细胞神经中，特别是在移植后，我们在2016年报道了这一情况。将神经末端缝合到供体神经上，更丰富的雪旺细胞在短时间内迁移并成功充满了移植神经的整个区域。由于我们设施的转基因动物研究设施正在进行翻新工程，因此创建上述模型变得困难。因此，有必要冷冻曾经繁殖过的小鼠的受精卵。另外，由于我同时被转移到其他设施，所以我在目的地完成了孵化冷冻受精卵和饲养转基因小鼠的程序，然后在原来的设施中孵化并运送到目的地开始研究。尽管培育 GFP 阳性小鼠需要一些时间，但我们开始创建一个模型，其中将 1 毫米直径的衬垫端到端缝合到供体神经。制作了长度约为10毫米的端侧缝合模型，但由于衬垫柔韧性差，很难将两端并排缝合。此外，所饲养的GFP阳性小鼠的股神经通常很细，使得用不灵活的利纳乌斯缝合神经变得困难。我们制作了几个神经一端缝合的模型作为实验前模型，并使用实时成像确认了荧光显色，但无法确认显色。而且，我转入的转基因动物研究设施决定进行改造，继续饲养老鼠变得困难。随着时间的推移，人们使用实时成像技术观察雪旺细胞的迁移，但这种情况仍然使继续模型创建变得困难。