短期的電気刺激による無細胞化神経への端側神経縫合を用いたシュワン細胞付加の可能性

使用端到端神经缝合线通过短期电刺激将雪旺细胞添加到无细胞神经的可能性

基本信息

批准号：
17K11550
负责人：
吉澤秀和
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は幼弱化シュワン細胞が蛍光発色するnestin-GFP mouse を保有し用いることで、Donor 神経に少なくとも軽微な損傷を加えることで多くのシュワン細胞の遊走が無細胞化神経内に観察され、特に移植神経の両側端をDonor 神経へ端側神経縫合を行なった群でさらに豊富なシュワン細胞が短期間に遊走し移植神経全域へ充填することに成功し2016年に報告した。当施設の遺伝子組み換え動物の研究施設の改修工事が行われることとなり、上記モデルが作成困難な状況となった。そのため、一度繁殖していたマウスを凍結受精卵の状態にする必要に迫られた。また、時期を同じく他施設へ出向となったため、凍結受精卵を孵化させ出向先にて遺伝子改変マウスを飼育する手続きが完了し、元の施設で孵化させ出向先に搬入し研究を開始した。GFP-positiveのmouseの繁殖に時間を要したが、直径１mmのリナーブをDonor神経に端側縫合するモデル作成を開始した。長さを10mm程度として端側縫合モデルの作成を行ったが、リナーブの柔軟性が乏しく両側端を端側縫合することは困難であった。また、繁殖されたGFP-posivite mouseの大腿神経の大きさも細いものが多く、柔軟性の乏しいリナーブとの神経縫合が困難であった。片端を端側神経縫合したモデルを前実験モデルとして数匹作成し、Live imagingでの蛍光発色を確認したが、発色が確認できなかった。さらに、出向先の遺伝子組み換え動物の研究施設の改修工事が決定し、マウスの飼育の継続が困難となった。遺伝子組み換え動物をLive imaging技術を用いて経時的に観察し、シュワン細胞の遊走を観察しているため、相次いでモデル作成の継続困難な状況のため、モデル作成の段階で継続ができない状況が続いた。

我们在2016年报道说，少年弱化的雪旺细胞携带和使用荧光着色的Nestin-GFP小鼠，并且至少对供体神经的损害至少造成较小的损害，许多schwann细胞在细胞化的神经中观察到许多。特别是，在将植入神经的两侧缝合到供体神经的一组中，更丰富的schwann细胞在短时间内迁移并填充整个植入的神经。该设施的转基因动物研究机构正在进行翻新，因此很难创建上述模型。因此，有必要将小鼠饲养到冷冻受精卵的状态中。此外，由于患者同时借调了另一个设施，因此孵化冷冻受精卵并在借调的目的地上抬高转基因小鼠的手术已完成，在原始设施中孵化并运送到借用的目的地，并开始了研究。尽管花了一些时间来繁殖GFP阳性小鼠，但我们开始创建一个模型，其中直径为1 mm的Linab缝合到供体神经。尽管端侧缝合线模型的长度约为10 mm，但衬里的柔韧性较差，因此很难将两端的两侧缝合。此外，育种GFP-Posivite小鼠的股骨神经通常很薄，因此很难用柔性较差的Linab缝合神经。使用一端的一端神经缝合线作为先前的实验模型创建了几种模型，并使用实时成像确认了荧光着着色，但尚未确认颜色发育。此外，已决定借调的转基因动物的研究机构的翻新工作，因此很难继续饲养小鼠。由于使用实时成像技术观察到转基因动物，并且观察到Schwann的细胞迁移，因此很难继续对一个接一个地进行建模，并且不可能在建模阶段继续进行。