膵癌、肝癌のアポトーシスと血管新生の増殖・転移、及び予後への関与の解明

阐明细胞凋亡和血管生成在胰腺癌和肝癌增殖、转移和预后中的作用

基本信息

批准号：
10671141
负责人：
森田眞照
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Osaka Medical College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10671141/
关键词：
p27^<kip1>膵癌 MRP-1 KAI-1 p27^<Kipl>Ki67

项目摘要

MRP-1及びKAI-1に特異的primerを用いPCRを行った。サイクル数は膵臓癌細胞株を用いてPCR産物が指数的増加を示す範囲を求め、鋳型量の希釈系列にて定量性が保たれるサイクルを定量可能な至適回数として求めた。KAI-1についても特異的primerを用いて同様に至適回数を設定し、それぞれ膵臓癌切除症例の凍結標本に対してRT-PCR法による半定量的解析を行った。その結果、いづれの蛋白においても滅弱例は発現例に比べ明らかな有意差は認めないものの予後不良の傾向があった。また同時に行った免疫組織化学染色において、これらの結果は細胞膜の染色性と一致した。これをin vitroにおいて実証するべく膵癌細胞株であるpanc-1を用いてsense及びantisense transfectantを作成し細胞機能解析を行った。細胞増殖能においてはこれらのtransfectantとparent cellの間に有意差は認められなかったが、細胞外基質への細胞接着能はantisense transfectantで、また細胞凝集能はsense transfectantで有意に亢進していた。マトリゲルを用いた細胞浸潤能ではantisense transfectantで有意に亢進しておりいづれの結果においもMRP-1及びKAI-1の発現減弱が癌の進行を増強する可能性があることが示された。現在、作成したtransfectantを用いて動物実験を施行中である。今後、MRP-1及びKAI-1は予後の指標となるターゲット遺伝子になりうると同時にMRP-1及びKAI-1を遺伝子治療に応用することで膵臓がんにたいする効果的な治療が得られると考えられる。

使用MRP-1和KAI-1特异性引物进行PCR。利用胰腺癌细胞系确定PCR产物呈指数增长的范围，以模板量的稀释系列中保持定量的循环为最佳循环数。用于量化。对于KAI-1，我们还使用特定引物设定了最佳次数，并使用RT-PCR对胰腺癌切除病例的冷冻标本进行了半定量分析。结果，虽然任何蛋白质水平较弱的病例与表达的病例相比没有观察到明显的显着差异，但存在预后较差的趋势。此外，在同时进行的免疫组织化学染色中，这些结果与细胞膜的染色特性一致。为了在体外证明这一点，我们使用胰腺癌细胞系 panc-1 创建了正义和反义转染子，并分析了它们的细胞功能。虽然这些转染子与亲本细胞之间的细胞增殖能力没有观察到显着差异，但反义转染子中细胞与细胞外基质的粘附显着增强，并且正义转染子中细胞聚集能力显着增强。反义转染剂显着增强了使用 Matrigel 的细胞侵袭能力，这两个结果都表明 MRP-1 和 KAI-1 的表达减弱可能会促进癌症进展。我们目前正在使用所创建的转染子进行动物实验。未来，我们相信MRP-1和KAI-1可以成为作为预后指标的靶基因，通过将MRP-1和KAI-1应用于基因治疗，可以获得对胰腺癌的有效治疗。完成吧。