脳損傷後の神経回路網再建を目指した神経再生療法の開発

开发旨在重建脑损伤后神经网络的神经再生疗法

• 批准号: 15H04951
• 负责人: 川原 信隆
• 金额: $ 8.82万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15H04951/
• 关键词: Lotus; 神経再生; 軸索再生; 脳損傷; 脳梗塞

1) 平成27年度は、前期の研究の継続として、遺伝子改変マウス脳梗塞モデルでの、行動解析と神経軸索再生の検討を行った。その結果、Lotus過剰発現マウスではBederson testにて有意な運動能力の改善が得られ、脳幹部と頚髄にて対側(非損傷側から)の有意な神経軸索の再生が見られた。これらは、発現しているLotusの量と相関しており、過剰発現Lotusによる脳梗塞後の機能回復が可能となったと考えられ、現在論文を投稿するところである。2) 胎児からの成体脳での歯状回での遊走障害に関しては、残念ならが最終的に傾向はあったものの有意な差がえられなかった。そのため、次年度予定を繰り上げて研究を進めることとした。3) 実験系をラットに移行するためにRat Lotusを過剰発現するTgラットを作成した。また、ラットLotusを検出するより良好な抗体を作成した。RT-PCRにて導入遺伝子と蛋白発現との関連は良好であることを確認した。損傷モデルとしては、脳梁離断モデルと、皮質運動野損傷モデルを検討した。i)脳梁離断モデル : 脳固定装置を用いてstereotaxicに脳梁を切断するモデルを作成した。DAを注入すると脳梁離断面を超えて右側の脳梁に染色された神経軸索が確認された。今後遺伝子発現や電気生理学的に検討を追加する。ii)皮質運動野損傷モデル : 硬膜外から刺激可能なgrid電極を作成し、後肢領域を刺激することで下肢骨格筋から誘発反応を記録することに成功し、電気生理学的検索の準備はほぼ完了した。脊髄より逆行性トレーサー(FG)を注入し上肢運動野の錐体細胞が染まることを確認した。今後は腰髄注入も検討する予定である。これらの検証後に、運動野の損傷モデルを作成する予定である。

1）在2015财年，作为先前研究的延续，我们在转基因小鼠大脑梗塞模型中研究了行为分析和神经X。结果，在过表达莲花的小鼠的贝德森测试中，运动性能显着改善，并且在对侧侧（来自未受伤的一侧）的神经轴突在脑干和宫颈索中观察到了显着的再生。这些与表达的莲花量相关，据信，过表达的莲花已在大脑梗塞后启用了功能恢复，我目前正在提交论文。 2）关于成人大脑中胎儿的齿状回迁移障碍，不幸的是，最终存在趋势，但没有显着差异。因此，我们决定在下一个财政年度提高研究时间表。 3）创建过表达大鼠莲花的TG大鼠是为了将实验系统迁移到大鼠中。此外，还产生了更好的抗体来检测大鼠莲花。已经证实，通过RT-PCR，转基因与蛋白质表达之间的关系是良好的。我们检查了call体剖析模型和皮质运动区域损伤模型。 i）Callosum移植模型：创建了用于使用大脑固定设备切割callos骨的模型。注入DA时，在callo骨部分之外，确认了在callosum右侧染色的神经轴突。将来，我们将添加有关基因表达和电生理方面的进一步研究。 ii）皮质运动区域损伤模型：我们通过创建可以从硬膜外刺激并刺激后肢区域刺激的网格电极来成功记录下肢骨骼肌的诱发反应，并几乎完成了电生理搜索的准备。将逆行示踪剂（FG）注入脊髓中，以确认上肢运动区域中的锥体细胞被染色。我们计划将来考虑腰椎注射。经过这些验证后，我们计划为电动机皮层创建损坏模型。

项目成果

Overexpressed LOTUS improves functional recovery after brain focal ischemia in mice

过度表达的 LOTUS 可改善小鼠脑局灶性缺血后的功能恢复

• 发表时间: 2015
• 作者: Takase H;Yokoyama T;Kurihara Y;Takei K;Kawahara N
• 通讯作者: Kawahara N