制御性T細胞の機能維持機構に関する分子基盤的研究

调节性T细胞功能维持机制的分子基础研究

• 批准号: 12J08459
• 负责人: 深谷 知宏
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J08459/
• 关键词: 抑制性 T 細胞; リプログラミング; エピジェネテイクス; インターフェロンγ; Th17; ヒストン修飾; DNA メチル化阻害; 制御性T細胞; レポーターマウス

Slnad2/3両欠損マウスでもnTregの発生は正常に起こることから、胸腺においてはTGFβに依存しない何らかのFoxp3発現維持機構が存在することが示唆される。活性化型T細胞を抑制型に転換するというT細胞のリプログラミングの目標のために、Smad非依存的にFoxp3を誘導しうる遺伝子を単離することをめざした。Tregで発現の高い転写因子を中心に約150遺伝子を完全長cDNAライブラリーよりピックアップし、293細胞を用いた Foxp3プロモーター/ルシフェラーゼによる機能的なスクリーニングを行った。この方法から核内オーファン受容体であるNr4a2がFoxp3プロモーターを直接活性化することを見いだした。Nr4a2のみをT細胞で欠損させたマウスを作製し解析を行ったが、そのマウスではTregは正常に分化し、自己免疫疾患も見られなかった。ファミリー分子であるNr4a1とNr4a3による機能重複の可能性が考えられた。そこで、Nr4a1, Nr4a2, Nr4a3全てをT細胞特異的に欠損させたマウス個体(Nr4a-TKOマウス)を作成し解析を行った。その結果、このマウスでは胸腺・末梢共にTregがほぼ全く存在しないことが明らかとなった。次にシングルノックアウトマウス、ダブルノックアウトマウスを解析することで各因子の関与の度合いを解析した。その結果、各因子のシングルノックアウトでは顕著なフェノタイプは確認されなかった。さらにNr4a1-Nr4a2、Nr4a2-Nr4a3の組み合わせのダブルノックアウトでもTregは発生し自己免疫疾患も見られなかったが、Nr4al-Nr4a3のダブルノックアウトでは自己免疫疾患がみられ、Treg分化の減少も確認された。これらの結果はNr4a1とNr4a3の寄与が大きいことが示唆している。今後NR4aの活性を制御することで新たな免疫疾患の制御方法の確立をめざす。

NTREG的发展通常发生在SLNAD2/3缺陷的小鼠中，这表明胸腺中FOXP3表达维持的某些独立于TGFβ的机制。为了通过将活化的T细胞转化为抑制性形式来重新编程T细胞，我们的目的是分离可以以Smad无关的方式诱导Foxp3的基因。从全长cDNA文库中挑选了大约150个基因，主要是在Treg中高度表达的转录因子，并使用293个细胞使用FOXP3启动子/荧光素酶进行了功能筛选。从这种方法中，我们发现核孤儿受体NR4A2直接激活FOXP3启动子。制备并分析了只有NR4A2缺乏T细胞的小鼠，但是在这些小鼠中正常分化Treg，并且没有观察到自身免疫性疾病。据认为，家族分子NR4A1和NR4A3可能会重叠。因此，制备并分析了所有NR4A1，NR4A2和NR4A3的小鼠个体（NR4A-TKO小鼠），其中所有NR4A1，NR4A2和NR4A3都缺乏。结果，揭示了该小鼠的胸腺和外围区域几乎没有Treg。接下来，分析了单个敲除小鼠和双基因敲除小鼠，以分析每个因素的参与程度。结果，在每个因素的单个敲除中没有明显的表型。此外，NR4A1-NR4A2和NR4A2-NR4A3的组合双重敲除引起Treg，并且未观察到自身免疫性疾病，但NR4AL-NR4A3的双重敲除表现出自身免疫性疾病，也证实了Treg差异的降低。这些结果表明NR4A1和NR4A3的贡献很大。将来，我们旨在通过控制NR4A的活动来建立一种控制免疫疾病的新方法。