ライブラリー・サブトラクション法による転移関連遺伝子の単離

通过文库消减法分离转移相关基因

基本信息

批准号：
10152239
负责人：
伊藤彰彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス・メラノーマ細胞株B16の亜株のうち、実験的転移能と自然転移能のいずれをも有するBL6細胞と、実験的転移能は有するが自然転移能は有しないF10細胞との間でcDNAライフラリーのサブトラクションを行って、自然転移能獲得に正の働きをしている遺伝子群の単離を試みた。BL6細胞において高発現する遺伝子を現在までに20数種単離した。そのうち次の遺伝子について解析を進めている。コネキシン26、プロテイン・フォスファターゼ2Aの制御サブユニット、Phakinin(中間径フィラメント)、アセチルCoAトランスポーター、b-Myc、I-κbに結合する酵母遺伝子のマウス・ホモローグ、Zn・フィンガー・モチーフを持つ新規遺伝子。現在までの成果を以下に列挙する。1) コネキシンは自然転移能獲得に正の働きをしうる。この機能はコネキシンのサブタイプによる特異性があり、正常細胞(血管内皮細胞等)とのheterotypicなギャップ・ジャンクション形成能に依存するものと思われた。2) ヒト肺癌症例のスクリーニングで、転移ステージとコネキシン遺伝子発現との間に正の相関が見い出された。3) プロテイン・フォスファターゼ2A制御サブユニットの発現亢進は、BL6細胞のゲノム上第一イントロンにレトロトランスポゾンの挿入があるからで、そのアリルに由来する翻訳産物はN末に約70アミノ酸の欠失を生じていた。4) このフォスファターゼは焦点接着構成蛋白(インテグリンやパキシリン)と結合した。5) このフォスファターゼは細胞外基質に対するF10及びBL6細胞のspreading、migration、invasion能の評価において抑制性に機能した。即ち、細胞外基質-インテグリ系を介して細胞内に入るシグナルに対してフォスファターゼが負の制御を行っているものと考えられた。

在小鼠黑色素瘤细胞系B16的亚系中，具有实验性和自发性转移潜能的BL6细胞和具有实验性转移潜能但不具有自发性转移潜能的F10细胞之间存在cDNA寿命差异。，我们试图分离出一组在获得自发转移潜能中发挥积极作用的基因。迄今为止，我们已经分离出20多个在BL6细胞中高表达的基因。我们目前正在分析以下基因：连接蛋白 26、蛋白磷酸酶 2A 的调节亚基、Phakinin（中间丝）、乙酰辅酶 A 转运蛋白、b-Myc、结合 I-κb 的酵母基因的小鼠同源物、具有 Zn 指基序的新基因。迄今为止所取得的成就如下。 1）连接蛋白在获得自发转移潜能方面可以发挥积极作用。该功能似乎是连接蛋白亚型所特有的，并且取决于与正常细胞（例如血管内皮细胞）形成异型间隙连接的能力。 2）在筛查人类肺癌病例时，发现转移分期与连接蛋白基因表达呈正相关。 3）蛋白磷酸酶2A调节亚基表达增加是由于BL6细胞基因组第一个内含子插入了逆转录转座子，而该等位基因衍生的翻译产物在N位缺失了约70个氨基酸-终点站正在发生。 4) 该磷酸酶与粘着斑组成蛋白（整合素和桩蛋白）结合。 5)该磷酸酶对评价F10和BL6细胞向细胞外基质的扩散、迁移和侵袭能力具有抑制作用。换句话说，人们认为磷酸酶负向调节通过细胞外基质整合系统进入细胞的信号。