natural immunity dysregulation and relapse inducing factor in patient with opticospinal multiple sclerosis

视神经多发性硬化症患者自然免疫失调及复发诱发因素

基本信息

批准号：
19590994
负责人：
KAWANO Yuji
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Ehime University (2008)Kyushu University (2007)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590994/
关键词：
多発性硬化症自然免疫再発惹起因子 IL-17 好中球

项目摘要

まず好中球や好塩基球の正確な分離のための基礎実験として, フローサイトメトリーによる条件の決定を行った. 好塩基球に関しては数が極めて少ないため, CRTH2, CD200R, CD203c, FcεRIαなどを用いて同定, 分離を試みた. その結果, CRTH2は使用した抗体のせいか染色性が極めて不良であったが, 他の抗体, 特に抗FcεRIa抗体を用いたものでは明瞭に他の細胞分画と区別できた. その後の機能解析はうまくいかなかった. 大きな問題は細胞の数および純度であった. この点においては, 本申請期間の終了間際になり, より高精度の血球分離器の導入の目処が立ち, 実験に耐えるだけの細胞数と純度が確保できる可能性が出てきたため, 継続して行く計画としている.次にTh17細胞の解析に向けた同定と分化誘導のための基礎的研究を進めた. それにはこれまでに行ってきたTNFα, IL-2, IL-4, IFNγ産生細胞の末梢血と髄液での検出系を用いた. しかしIL-17はPMAとイオノマイシンで刺激後でも1%以下の割合でしか検出されていなかった. しかし刺激系をCytostim試薬に変更し, また検出分離系をIL-17 Secretion Assayに変更したところ, IL-17産生細胞を生きたまま分離可能となった. 並行して行った細胞内, 髄液中のサイトカインOS-MSではTh1シフトと, 抗AQP4抗体の有無にかかわらずIL-17, およびその下流に属するIL-8, G-CSF濃度が上昇していることを明らかにした. IL-8は好中球の走化性に, G-CSFは好中球の分化, 成熟に関与しており, 視神経脊髄型多発性硬化症では, 通常型多発性硬化症とは異なった自然免疫異常の存在が示唆された.

首先，作为准确分离中性粒细胞和嗜碱性粒细胞的基础实验，我们使用流式细胞术确定了条件。由于嗜碱性粒细胞数量极其稀少，我们使用了CRTH2、CD200R、CD203c、FcεRIα等。因此，CRTH2的染色非常差，可能是由于使用的抗体，但其他抗体，特别是，抗 FcεRIa 抗体与其他细胞组分明显不同，主要问题是细胞的数量和纯度。更精确的血细胞分离器即将出现，并且有可能确保细胞的数量和纯度能够承受实验。我们计划继续这项工作。接下来，我们继续进行基础研究，用于分析 Th17 细胞的鉴定和分化诱导。这将涉及到 TNFα、IL-2、IL-4 和 IFNγ 的使用，我们已经进行了这些研究，到目前为止，我们使用的是在外周血和脑脊液中产生细胞的检测系统，但是即使在用PMA和离子霉素刺激后，IL-17的检测率也低于1%。但是，我们将刺激系统改为Cytostim试剂。 ,此外，通过将检测分离系统更改为IL-17分泌测定，可以在存活时分离产生IL-17的细胞。同时，细胞和脑脊液中的细胞因子OS-MS检测到Th1转变。结果表明，无论抗 AQP4 抗体是否存在，IL-17、IL-8（IL-17 的下游成员）和 G-CSF 浓度都会增加。 G-CSF 分化中性粒细胞，它参与成熟，并且有人提出，在视神经脊髓多发性硬化症中，存在与正常多发性硬化症不同的先天免疫异常。