natural immunity dysregulation and relapse inducing factor in patient with opticospinal multiple sclerosis

视神经多发性硬化症患者自然免疫失调及复发诱发因素

基本信息

批准号：
19590994
负责人：
KAWANO Yuji
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Ehime University (2008)Kyushu University (2007)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590994/
关键词：
多発性硬化症自然免疫再発惹起因子 IL-17 好中球

项目摘要

まず好中球や好塩基球の正確な分離のための基礎実験として, フローサイトメトリーによる条件の決定を行った. 好塩基球に関しては数が極めて少ないため, CRTH2, CD200R, CD203c, FcεRIαなどを用いて同定, 分離を試みた. その結果, CRTH2は使用した抗体のせいか染色性が極めて不良であったが, 他の抗体, 特に抗FcεRIa抗体を用いたものでは明瞭に他の細胞分画と区別できた. その後の機能解析はうまくいかなかった. 大きな問題は細胞の数および純度であった. この点においては, 本申請期間の終了間際になり, より高精度の血球分離器の導入の目処が立ち, 実験に耐えるだけの細胞数と純度が確保できる可能性が出てきたため, 継続して行く計画としている.次にTh17細胞の解析に向けた同定と分化誘導のための基礎的研究を進めた. それにはこれまでに行ってきたTNFα, IL-2, IL-4, IFNγ産生細胞の末梢血と髄液での検出系を用いた. しかしIL-17はPMAとイオノマイシンで刺激後でも1%以下の割合でしか検出されていなかった. しかし刺激系をCytostim試薬に変更し, また検出分離系をIL-17 Secretion Assayに変更したところ, IL-17産生細胞を生きたまま分離可能となった. 並行して行った細胞内, 髄液中のサイトカインOS-MSではTh1シフトと, 抗AQP4抗体の有無にかかわらずIL-17, およびその下流に属するIL-8, G-CSF濃度が上昇していることを明らかにした. IL-8は好中球の走化性に, G-CSFは好中球の分化, 成熟に関与しており, 視神経脊髄型多発性硬化症では, 通常型多発性硬化症とは異なった自然免疫異常の存在が示唆された.

首先，作为用于准确分离嗜中性粒细胞和嗜碱性物质的基本实验，通过流式细胞仪确定条件。由于嗜碱性粒细胞的数量极少，因此我们尝试使用CRTH2，CD200R，CD203C，FCεRIα等识别和分离它们，并且其他抗体的染色极差，但其他抗体，尤其是抗FCεRIA抗体，与其他细胞级数明确区分了。随后的功能分析未成功。主要问题是细胞的数量和纯度。在这方面，由于申请期的结束即将结束，因此有可能引入更高精确的血细胞分离器，并且有可能确保细胞的数量和纯度来承受实验。我们计划继续。接下来，我们进行了基础研究，以分析Th17细胞和诱导分化。我们使用了我们先前进行的TNFα，IL-2，IL-4和IFNγ产生细胞的外周血和脑脊液的检测系统。然而，用PMA和离子霉素刺激后，以低于1％的比率检测到IL-17。但是，当我们将刺激系统更改为Cytostim试剂并将检测分离系统更改为IL-17分泌测定法时，IL-17能够在还活着的同时分离IL-17。同时，脑脊髓液中的细胞因子OS-MS，IL-17与IL-17的IL-17转移，无论是否存在抗AQP4抗体，以及属于其下游侧的IL-8。据显示，G-CSF浓度升高。 IL-8参与中性粒细胞趋化性，G-CSF参与中性粒细胞分化和成熟，以及神经脊髓视神经多发性硬化症，存在与常规多发性硬化症不同的先天免疫异常。