膜内骨化及び軟骨内骨化に伴う血管新生過程に関する研究

膜内骨化和软骨内骨化相关血管生成过程的研究

基本信息

批准号：
08672065
负责人：
笹野泰之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:軟膜内骨化の過程において、血管の侵入あるいは新生が骨形成にどのように関与するのかについて検討することを目的とした。この際ラット下顎骨の膜内骨化を観察の対象とし、脛骨における軟骨内骨化の過程と比較検討した。方法:胎生14、15、16、17、18、19、及び20日齢のWistar系ラットを用いた。妊娠ラットから子宮を摘出後、胎児の頭部及び下肢を切断して4%パラホルムアルデヒドにて固定しパラフィン包埋試料または凍結試料を作製した。連続切片をつくり、隣接の切片を以下の方法で検討した。(1)血管基底膜の標識:ラミニン及びIV型コラーゲンに対する免疫組織学。(2)間葉細胞の集合に関連する細胞外基質の標識:フィブロネクチンに対する免疫組織学。(3)骨基質タンパクの標識:I型コラーゲン及びオステオカルシンに対する免疫組織学。(4)骨基質プロテオグリカンの標識:アルシアンブルー染色。(5)石灰化の検索:von Kossa染色。結果:下顎では胎生15日に骨形成部位に対応して間葉細胞の集合が見られ、フィブロネクチンに対する免疫反応が認められた。またI型コラーゲンとプロテオグリカンを含う未熟な骨基質が形成されていたが、この基質内には血管は観察されなかった。胎生16日では骨基質にオステオカルシンに対する免疫反応と石灰化が見られ、また基質内へは血管に侵入していた。胎生17日以降ではオステルカルシンの免疫反応性と石灰化がさらに増し、骨基質内には多くの血管を認めた。一方、脛骨における骨基質の形成は胎生17日に始まり、胎生18日以降では下顎骨と同様に骨基質の成熟と石灰化の進行に伴い基質内への血管の侵入が見られた。考察:膜内骨化と軟骨内骨化の両方の骨形成過程において、血管は初期の未熟な骨基質の形成には直接は関与せず、その後の骨基質の成熟と石灰化の進行に重要な役割を演じると考えられる。

目的：本研究的目的是探讨软脑膜内骨化过程中血管侵袭或新生如何参与骨形成。此时，观察大鼠下颌骨膜内骨化，并与胫骨软骨内骨化过程进行比较。方法：使用胚胎第14、15、16、17、18、19和20天的Wistar大鼠。摘除怀孕大鼠的子宫后，切下胎儿的头部和下肢，并固定在4%多聚甲醛中，制备石蜡包埋样品或冷冻样品。制作连续切片，并使用以下方法检查相邻切片。 (1)血管基底膜标记：层粘连蛋白和IV型胶原的免疫组织学。 (2)与间充质细胞组装相关的细胞外基质的标记：纤连蛋白的免疫组织学。 (3)骨基质蛋白标记：I型胶原和骨钙蛋白的免疫组织学。 (4)骨基质蛋白多糖的标记：阿尔新蓝染色。 (5)寻找钙化点：von Kossa染色。结果：在胚胎第15天的下颌骨中，观察到与骨形成部位相对应的间充质细胞簇，并观察到纤连蛋白的免疫反应性。还形成了含有I型胶原和蛋白聚糖的未成熟骨基质，但在该基质内没有观察到血管。胚胎第16天时，骨基质中观察到对骨钙素的免疫反应和钙化，血管已侵入基质。胚胎第17天后，奥钙素免疫反应性和矿化进一步增强，并且在骨基质内观察到许多血管。另一方面，胫骨中骨基质的形成从胚胎第17天开始，从胚胎第18天开始，随着骨基质的成熟和矿化的进展，血管进入基质，就像下颌骨一样。讨论：在膜内和软骨内骨化骨形成过程中，血管并不直接参与初始未成熟骨基质的形成，但对骨基质随后的成熟和矿化的进展很重要。发挥作用。