RhoGTPasesの下流蛋白質DIP/WISHのノックアウトマウスの解析

基因敲除小鼠 DIP/WISH（RhoGTPases 下游蛋白）的分析

基本信息

批准号：
19590294
负责人：
福見知子
金额：
$ 3万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19590294/
关键词：
細胞・組織蛋白質脳・神経シグナル伝達細胞骨格

项目摘要

研究者が2001年に見いだしたDIP/WISHは、低分子量G蛋白質Rhoの下流蛋白質mDiaと(N-)WASPに結合するadaptor proteinである。この遺伝子改変動物(ノックアウトマウス)を作製したので、細胞骨格再編成(actin polymerization, Arp2/3 activation,microtubule assembly)に関わる細胞機能およびそれに伴って起こると期待される器官形成について詳細な検討を加える。ノックアウトマウスと野生型マウスからMEF(mouse embryonic fibroblast)を採取し、これを用いてtime-lapse法を用いたmigration assay、wound heahng assayを行い、細胞運動能を比較検討した。まず、MEFのphenotypeがノックアウトマウス由来のものではstress fiberの増強が見られ、細胞運動能ではノックアウトマウス由来のMEFは新たな細胞接着斑の形成に乏しく、運動能も低下していることが判った。また、細胞接着能を検討したところ、これにおいてもノックアウトマウス由来のMEFのcell spreadingが遅延、未熟であることが判った。生化学的な検討より、これらの現象に伴い、マウス由来のMEFにおけるRhoのactivityが刺激前から増加していることが判った。この結果は、研究者が2004年に報告した結果(DIPはRhoを不活性化する)と一致するものであった。現在さらに、MEFを用い、proliferation,apotosis等を検討中である。さらに、DIP/WISHの発現の多い、中枢神経系において、形態や行動実験を検討中である。

DIP/WISH 是研究人员于 2001 年发现的一种衔接蛋白，可与低分子量 G 蛋白 Rho 的下游蛋白 mDia 和 (N-)WASP 结合。创建这种转基因动物（基因敲除小鼠）后，我们将对与细胞骨架重组（肌动蛋白聚合、Arp2/3 激活、微管组装）相关的细胞功能以及预期与之相关的器官形成进行详细研究。。从基因敲除小鼠和野生型小鼠中收集 MEF（小鼠胚胎成纤维细胞），并使用延时方法进行迁移测定和伤口愈合测定，以比较和检查细胞运动性。首先，在来自基因敲除小鼠的MEF表型中，观察到了增强的应力纤维，并且在细胞运动性方面，发现来自基因敲除小鼠的MEF新细胞粘附焦点的形成不良并且运动性降低。此外，当我们检查细胞粘附能力时，我们发现来自基因敲除小鼠的MEF的细胞扩散被延迟且不成熟。生化研究表明，除了这些现象之外，小鼠来源的 MEF 中的 Rho 活性甚至在刺激之前就增加了。这一结果与研究人员在 2004 年报道的结果一致：DIP 使 Rho 失活。我们目前正在使用MEF研究增殖、凋亡等。此外，我们目前正在研究 DIP/WISH 经常表达的中枢神经系统的形态和行为实验。