Structural and cell biological study of sphingolipid metabolic enzyme

鞘脂代谢酶的结构和细胞生物学研究

• 批准号: 19570113
• 负责人: TSUGE Hideaki
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Tokushima Bunri University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19570113/
• 关键词: 構造生物学; スフィンゴミエリン代謝酵素; スフィンゴシンキナーゼ; スフィンゴミエリン代謝系酵素; スフィンゴミエリナーゼ; スフィンゴシン1リン酸; 巻き戻し; 結晶化; 結晶構造解析; 局在化

スフィンゴシン1リン酸(S1P)は、シグナル伝達分子として重要な作用を持つ。このS1P を作る酵素ヒトスフィンゴシンキナーゼ(SPHK1)の結晶構造解析を最終目標に発現、結晶化を目指す。大腸菌と蚕での発現の検討の結果、His tagged SPHK1 のインクルージョンボディからの巻き戻しを行い、0.1M のアルギニン存在下で活性を持った酵素を大量に精製した。しかしオリゴマーを取る事から巻き戻しが十分とは考えられず、この酵素から結晶化を行ったが回折を得られる結晶は得られていない。また細胞内でのSPHK1 結合タンパク質の解析を行っており、新規の結果が得られつつある。

1-磷酸鞘氨醇（S1P）作为信号转导分子具有重要的功能。最终目标是分析产生这种 S1P 的人鞘氨醇激酶 (SPHK1) 的晶体结构，并旨在表达和结晶它。作为在大肠杆菌和蚕中进行表达研究的结果，我们从其包涵体中解开了带有组氨酸标签的 SPHK1，并纯化了大量在 0.1M 精氨酸存在下具有活性的酶。然而，由于低聚物被除去，因此认为解旋不充分，并且尽管从该酶进行结晶，但没有获得能够获得衍射的晶体。我们还在分析细胞内的 SPHK1 结合蛋白，并开始获得新的结果。

项目成果

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「X 線結晶構造解析と質量分析による生理活性タンパク質の構造機能相関の研究」『アルギニン特異的ADP リボシル化毒素とアクチン複合体のX線結晶構造解析』

“通过X射线晶体学和质谱法研究生理活性蛋白质的结构-功能关系”“精氨酸特异性ADP核糖基化毒素和肌动蛋白复合物的X射线晶体结构分析”

• 发表时间: 2009
• 作者: Tsuge H.;Kawazoe T.;等;津下英明
• 通讯作者: 津下英明

-タンパク質・ペプチド研究の現状と展望-「アルギニン特異的ADP リボシル化毒素とアクチン複合体のX線結晶構造解析」

- 蛋白质/肽研究现状与展望-“精氨酸特异性ADP核糖基化毒素与肌动蛋白复合物的X射线晶体结构分析”

• 发表时间: 2008
• 作者: Tsuge H.;Kawazoe T.;等;津下英明;津下英明;津下英明;津下英明;津下英明
• 通讯作者: 津下英明

Aeromonas sobriaセリンプロテアーゼの結晶構造構造解析

温和气单胞菌丝氨酸蛋白酶的晶体结构分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 津下英明;宇都宮敬子 等;Tsuge H.;津下英明
• 通讯作者: 津下英明

ADPリボシル化酵素とフラビン酵素の構造機能相関

ADP-核糖基化酶与黄素酶的构效关系

• 发表时间: 2007
• 作者: 津下英明;宇都宮敬子 等;Tsuge H.;津下英明;Tsuge H.;津下 英明;津下英明;津下 英明
• 通讯作者: 津下 英明