Study of apoptotic induction through siRNA of c-FLIP in squamous cell carcinoma cells

c-FLIP siRNA诱导鳞状细胞癌细胞凋亡的研究

基本信息

批准号：
19390524
负责人：
IWASE Masayasu
金额：
$ 10.73万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

FasL/TRAILはデスレセプター(Fas/DR4, DR5)と結合すると、速やかにFADDとcaspase-8との複合体、DISCを形成する。c-FLIPは、DISC形成に際してcaspase-8とヘテロダイマーを形成してcaspase-8の活性化を抑制する。本研究では、扁平上皮癌細胞のc-FLIPの発現に着目し、その制御機序について検討した。その結果、c-FLIPのアンチセンスを導入した扁平上皮癌細胞が抗Fas抗体やTRAIL誘導アポトーシスの感受性を亢進することを確認した。扁平上皮癌を含む種々の癌細胞はFasやTRAILRを高発現しているが、FasLやTRAILによるアポトーシスに抵抗性を示すことが多い。頭頸部癌治療に汎用されている、CDDP、5-FUおよびDOCは癌細胞のFasの発現増強やc-FLIPの発現抑制を介してデスレセプター誘導アポトーシスを亢進することを示した。すなわち、扁平上皮癌細胞のアポトーシス誘導経路としてextrinsic経路も重要であることを示唆するものである。本研究では、分子標的として臨床的に注目されている薬剤について、扁平上皮癌細胞のデスレセプター誘導アポトーシスへの影響について検討した。分子標的薬剤として抗EGFR抗体(C225)、EGFRチロシンキナーゼ阻害剤(AG1478)、PI 3-K阻害剤(LY294002、wortmannin)、プロテアソーム阻害剤(MG132)とHDAC阻害剤(SAHA)を用いた。EGFR阻害剤、PI 3-K阻害剤およびプロテアソーム阻害剤で処理した扁平上皮癌細胞は、抗Fas抗体およびTRAIL誘導アポトーシスがc-FLIPの発現抑制を介して亢進された。プロテアソーム阻害剤は、DR4およびDR5の発現も増強した。さらに、これらの阻害剤は癌細胞のBcl-2ファミリーやIAPファミリーの発現変化も誘導した。

当Fasl/Trail与死亡受体（FAS/DR4，DR5）结合时，它很快形成了FADD和CASPASE-8圆盘的复合物。 C-FLIP形成圆盘形成后与caspase-8形成异二聚体，从而抑制caspase-8的激活。在这项研究中，我们专注于鳞状细胞癌细胞中C叶片的表达，并检查了其调节机制。结果，已经证实，用反量c翼引入的鳞状细胞癌细胞提高了对抗FAS抗体和径向诱导的凋亡的敏感性。各种癌细胞，包括鳞状细胞癌，高度表达FAS和TRAILR，但通常对FASL和TRAIL引起的凋亡具有抵抗力。广泛用于头颈癌的CDDP，5-FU和DOC已被证明通过增强癌细胞中的FAS表达并抑制C-FLIP表达来增强死亡受体诱导的凋亡。换句话说，这表明外部途径也很重要，这是诱导鳞状细胞癌细胞凋亡的途径。在这项研究中，我们研究了吸引临床兴趣的药物的作用，作为分子靶标对死亡受体诱导的鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。抗EGFR抗体（C225），EGFR酪氨酸激酶抑制剂（AG1478），PI 3-K抑制剂（LY294002，WORTMANNIN），蛋白酶体抑制剂（MG132）和HDAC抑制剂（SAHA）用作分子靶型。通过抗FAS抗体和TRAIL诱导的凋亡，通过抑制C-FLIP表达增强了用EGFR抑制剂，PI 3-K抑制剂和蛋白酶体抑制剂治疗的鳞状细胞癌细胞。蛋白酶体抑制剂还增强了DR4和DR5的表达。此外，这些抑制剂还诱导癌细胞的Bcl-2和IAP家族的变化。