Study of apoptotic induction through siRNA of c-FLIP in squamous cell carcinoma cells

c-FLIP siRNA诱导鳞状细胞癌细胞凋亡的研究

基本信息

批准号：
19390524
负责人：
IWASE Masayasu
金额：
$ 10.73万
依托单位：
Showa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

FasL/TRAILはデスレセプター(Fas/DR4, DR5)と結合すると、速やかにFADDとcaspase-8との複合体、DISCを形成する。c-FLIPは、DISC形成に際してcaspase-8とヘテロダイマーを形成してcaspase-8の活性化を抑制する。本研究では、扁平上皮癌細胞のc-FLIPの発現に着目し、その制御機序について検討した。その結果、c-FLIPのアンチセンスを導入した扁平上皮癌細胞が抗Fas抗体やTRAIL誘導アポトーシスの感受性を亢進することを確認した。扁平上皮癌を含む種々の癌細胞はFasやTRAILRを高発現しているが、FasLやTRAILによるアポトーシスに抵抗性を示すことが多い。頭頸部癌治療に汎用されている、CDDP、5-FUおよびDOCは癌細胞のFasの発現増強やc-FLIPの発現抑制を介してデスレセプター誘導アポトーシスを亢進することを示した。すなわち、扁平上皮癌細胞のアポトーシス誘導経路としてextrinsic経路も重要であることを示唆するものである。本研究では、分子標的として臨床的に注目されている薬剤について、扁平上皮癌細胞のデスレセプター誘導アポトーシスへの影響について検討した。分子標的薬剤として抗EGFR抗体(C225)、EGFRチロシンキナーゼ阻害剤(AG1478)、PI 3-K阻害剤(LY294002、wortmannin)、プロテアソーム阻害剤(MG132)とHDAC阻害剤(SAHA)を用いた。EGFR阻害剤、PI 3-K阻害剤およびプロテアソーム阻害剤で処理した扁平上皮癌細胞は、抗Fas抗体およびTRAIL誘導アポトーシスがc-FLIPの発現抑制を介して亢進された。プロテアソーム阻害剤は、DR4およびDR5の発現も増強した。さらに、これらの阻害剤は癌細胞のBcl-2ファミリーやIAPファミリーの発現変化も誘導した。

当 FasL/TRAIL 与死亡受体（Fas/DR4、DR5）结合时，它立即形成 DISC，即 FADD 和 caspase-8 的复合物。 c-FLIP 在 DISC 形成过程中与 caspase-8 形成异二聚体并抑制 caspase-8 激活。本研究重点关注c-FLIP在鳞状细胞癌细胞中的表达并探讨其调控机制。结果，我们证实引入c-FLIP反义的鳞状细胞癌细胞对抗Fas抗体和TRAIL诱导的细胞凋亡的敏感性增加。各种癌细胞，包括鳞状细胞癌，高表达Fas和TRAILR，但通常表现出对FasL和TRAIL诱导的细胞凋亡的抵抗。常用于头颈癌治疗的 CDDP、5-FU 和 DOC 被证明可以通过增强癌细胞中 Fas 的表达并抑制 c-FLIP 的表达来增强死亡受体诱导的细胞凋亡。换句话说，这表明外在途径作为鳞状细胞癌细胞中的凋亡诱导途径也很重要。在这项研究中，我们研究了作为分子靶标而受到临床关注的药物对死亡受体诱导的鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。采用抗EGFR抗体（C225）、EGFR酪氨酸激酶抑制剂（AG1478）、PI 3-K抑制剂（LY294002，渥曼青霉素）、蛋白酶体抑制剂（MG132）、HDAC抑制剂（SAHA）作为分子靶向药物。在用 EGFR 抑制剂、PI 3-K 抑制剂和蛋白酶体抑制剂处理的鳞状细胞癌细胞中，抗 Fas 抗体和 TRAIL 诱导的细胞凋亡通过抑制 c-FLIP 表达而增强。蛋白酶体抑制剂还增强了 DR4 和 DR5 的表达。此外，这些抑制剂还诱导癌细胞中 Bcl-2 家族和 IAP 家族表达的变化。