Exploration of target proteins for ubiquitination using fluorescence anisotropy measurement

使用荧光各向异性测量探索泛素化的靶蛋白

• 批准号: 19380056
• 负责人: ABE Fumiyoshi
• 金额: $ 12.48万
• 依托单位: Aoyama Gakuin University (2010)Japan Agency for Marine-Earth Science and Technology (2007-2009)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19380056/
• 关键词: 蛍光偏光解消法; 時間分解測定; 細胞膜物性; 蛍光寿命; 出芽酵母; ユビキチン機構; 回転ブラウン運動; 分子間相互作用

This study approaches the finding of novel factors that interact with ubiquitination-related proteins by monitoring the rotational motion of proteins. First, I established the experimental procedure to quantify the rotational motion of membrane lipids in yeast. The defect in ergosterol biosynthesis resulted in a decrease in membrane rigidity and an increase in the rotational lipid motion. The measurement of fluorescein-labeled model proteins suggests that this technique is valid for proteins of less than 10 kDa. Sna3 was identified as a factor that potentially interacted with Rsp5 ubiquitin ligase. In the future study, I investigate the molecular interaction between Rsp5 and Sna3 using the system employed in this study.

这项研究通过监测蛋白质的旋转运动来了解与泛素化相关蛋白相互作用的新因素的发现。首先，我建立了实验程序，以量化酵母中膜脂质的旋转运动。麦角固醇生物合成的缺陷导致膜刚度降低和旋转脂质运动的增加。荧光素标记的模型蛋白的测量表明，该技术对于小于10 kDa的蛋白有效。 SNA3被确定为可能与RSP5泛素连接酶相互作用的因素。在将来的研究中，我使用本研究中使用的系统研究了RSP5和SNA3之间的分子相互作用。

项目成果

Mechanistic role of ergosterol in membrane rigidity and cycloheximide resistance in Saccharomyces cerevisiae

• DOI: 10.1016/j.bbamem.2008.12.002
• 发表时间: 2009-03-01
• 期刊: BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-BIOMEMBRANES
• 影响因子: 3.4
• 作者: Abe, Fumiyoshi;Hiraki, Toshiki
• 通讯作者: Hiraki, Toshiki

Overexpression of SNA3 stabilizes tryptophan permease Tat2, potentially competing for the WW domain of Rsp5 ubiquitin ligase with its binding protein Bul1

SNA3 的过表达可稳定色氨酸通透酶 Tat2，可能与其结合蛋白 Bul1 竞争 Rsp5 泛素连接酶的 WW 结构域

• 发表时间: 2010
• 期刊: FEBS Lett 584
• 作者: Hiraki;T.;Abe;F
• 通讯作者: F

フルコナゾールによる細胞膜の動的構造変化と erg3 株の耐性

氟康唑诱导的细胞膜动态结构变化及erg3菌株的耐药性

• 发表时间: 2009
• 作者: 鈴木 章太郎;竹川 薫;田中 直孝;阿部文快
• 通讯作者: 阿部文快

圧力とゲノムの摂動で測る細胞内のすき間

通过压力和基因组扰动测量细胞内间隙

• 发表时间: 2010
• 作者: O. Adachi;T. Yakushi;K. Matsushita;阿部文快
• 通讯作者: 阿部文快

Overexpression of SNA3 stabilizes tryptophan permease Tat2, potentially competing for the WW domain of Rsp5 ubiquitin ligase with its binding protein Bull

SNA3 的过表达可稳定色氨酸通透酶 Tat2，可能与其结合蛋白 Bull 竞争 Rsp5 泛素连接酶的 WW 结构域

• 发表时间: 2010
• 期刊: FEBS Lett. 584
• 作者: ZHAO;CR SAWAKI;Y.;SAKURAI;N.;SHIBATA D;KOYAMA;H;Toshiki Hiraki
• 通讯作者: Toshiki Hiraki