細胞内動態を制御したアデノウイルスベクターの開発

具有受控细胞内动力学的腺病毒载体的开发

• 批准号: 18890195
• 负责人: 小泉 直也
• 金额: $ 1.68万
• 依托单位: Showa Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890195/
• 关键词: 遺伝子; 薬学; バイオテクノロジー; 再生医療

研究代表者らの過去の検討により、アデノウイルスの受容体であるcoxsackievirus and adenovirusreceptor(CAR)、インテグリン、ヘパラン硫酸との結合性をすべて欠損させたトリプル改変型アデノウイルスベクターは、細胞内へ取り込まれた後の核移行量が著しく低下していることを示唆する結果を見出している。このことから本研究では、アデノウイルスベクターの効率的遺伝子発現に関与する核移行や転写活性に必須の細胞側、ウイルス側の因子を検索・同定することを目的としている。昨年度の検討において、アデノウイルスのヘパラン硫酸との結合能は細胞表面への結合には大きく関与せず、細胞内における細胞内動態において重要な機能を担っていることを明らかとしている。今年度は、これらの結果を下にさらに詳細な検討を進めるため、ファイバーシャフト蛋白質の作製を行っている。ファイバーシャフトのリコンビナント蛋白質を作成することで、シャフト蛋白質単独での機能を評価することが可能であることから、通常の5型アデノウイルスファイバーシャフト、ヘパラン硫酸との結合ドメインであるKKTKモチーフをGAGAに変異させたシャフト、5型よりも短い35型アデノウイルスファイバーシャフトの3種類を作製している。現在、PCRにてファイバーシャフトの遺伝子を増幅し、リコンビナント蛋白質作製のためのプラスミドに挿入した。今後、大腸菌を用いてリコンビナント蛋白質を作製・精製し、細胞内での機能を検討する。また、蛍光標識リコンビナント蛋白質なども作製し、より詳細な検討を行う。本研究はこれらアデノウイルス蛋白質の機能を解明し、さらに遺伝子導入効率に優れた遺伝子導入ベクターの開発につなげることを目的としている。本研究は科学研究費補助金(若手スタートアップ)の助成により推進されてきたが、平成19年度4月下旬より科学研究費補助金(若手研究B)の助成に変更して研究を継続していく。

先前的研究人员发现结果表明，三重修饰的腺病毒载体在与腺病毒受体，Coxsackievievirus和腺病毒受体（CAR），整合蛋白和硫酸乙酰肝素的结合特性中均具有所有缺陷，这些腺病毒载体已大大减少了进入细胞后的核转移量。因此，本研究旨在搜索和识别与腺病毒载体有效基因表达有关的核易位和转录活性至关重要的细胞和病毒因子。在去年的一项研究中，据表明，腺病毒与硫酸乙酰肝素的结合能力与细胞表面的结合没有显着涉及，而是在细胞内细胞内动力学中起重要功能。今年，我们正在准备纤维轴蛋白，以进一步进一步研究以下结果。 By creating recombinant proteins for fiber shafts, it is possible to evaluate the function of the shaft protein alone, and three types have been produced: a normal type 5 adenoviral fiber shaft, a shaft in which the KKTK motif, which is the binding domain of heparan sulfate, is mutated into GAGA, and a type 35 adenoviral fiber shaft, which is shorter than type 5. Currently, the纤维轴基因已通过PCR扩增，并插入质粒中以产生重组蛋白。将来，将使用大肠杆菌生产和纯化重组蛋白，并将检查其在细胞中的功能。另外，将产生荧光标记的重组蛋白等，并将进行进一步的详细检查。这项研究旨在阐明这些腺病毒蛋白的功能，并进一步发展具有极好基因转移效率的基因转移载体。这项研究是由科学研究的赠款（Young Startup）促进的，但是从2007年4月下旬开始，该研究将继续继续。