Analysis of CILP (cartilage intermediate layer protein ) transgenic mice with lumbar disc disease susceptibility

CILP（软骨中间层蛋白）转基因小鼠腰椎间盘疾病易感性分析

• 批准号: 18689903
• 负责人: SEKI Shoji
• 金额: $ 15.55万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18689903/
• 关键词: CILP; lumbar disc disease; transgenic mice; 腰椎椎間板; トランスジェニックマウス; 椎間板ヘルニア; 椎間板変性

背景: 我々は腰椎椎間板ヘルニア患者のDNAサンプルで、大規模な相関解析を行い、CILP遺伝子(cartilage intermediate layer protein)のI395Tにおいて有意な相関を見出した。さらにin vitroの機能解析から、CILP蛋白の高発現が椎間板変性に関わる可能性を見出した(Seki S et al, Nature Genet, 2005)。研究の目的:CILPトランスジェニックマウス(以下Tg マウス)を作成し、表現型の解析やin vivoにおけるCILPの役割を詳細に検討すること。方法: CILP Tg マウスの作成の方法は、軟骨特異的発現ベクター pNASS…(COL11A2 promoter、IVS1) を用い、このベクターにCILP遺伝子(C末にHA tagを挿入)を導入しマイクロインジェクションによってTg マウスを作成する。またこのTg マウスを用い、表現型を解析する。結果: CILP Tg マウスのlineの維持および繁殖遺伝子導入はPCR、mRNAはreal-time PCR法で確認し、CILP蛋白の発現解析は、HA抗体、N末、C末抗体の3種類使用し、これらでウエスタンブロット、免疫染色でTg マウスにおけるCILP蛋白の発現を確認できた。CILP Tg マウスの表現型の解析椎間板の構造(髄核、線維輪)を、組織学的に確認すると、サフラニン-O染色にて髄核組織の染色性が有意にTg マウス群で低下していた。さらに脊椎椎間板をMRIで評価すると、Tg マウスの腰椎MRIT2強調画像において、腰椎椎間板の輝度はノーマルマウスと比べて低下していたことから、明らかな椎間板変性の進行が認められたと考えられる。またTg マウスとノーマルマウスで、腰椎レントゲン上の椎間板高の違いを有意に認めている。CILP Tg マウスの頚椎椎間板変性、ヘルニアモデルの作成マウスの頚椎に不安定性を導入すると頚椎椎間板変性、ヘルニアができることがわかっており、このモデルで、変性誘導後の頚椎椎間板をレントゲン、組織学的評価を現在行っている。

背景：我们对来自腰椎椎间盘突出症患者的DNA样品进行了广泛的相关性分析，并发现CILP基因的I395T（软骨中间层蛋白质）有显着相关性。此外，体外功能分析表明，CILP蛋白的高表达可能与椎间盘变性有关（Seki S等，Nature Genet，2005）。研究目标：创建CILP转基因小鼠（以下称TG小鼠）并分析表型并详细检查CILP在体内的作用。方法：为了创建CILP TG小鼠，使用软骨特异性表达矢量PNASS…（COL11A2启动子，IVS1）用于将CILP基因（C在C的末端插入HA TAG）引入该载体，并通过微分注射创建TG小鼠。还使用此TG小鼠分析了表型。结果：通过PCR证实了CILP TG小鼠的维持和繁殖基因转移，并通过实时PCR确认mRNA，并通过HA抗体，N末端和C末端抗体分析CILP蛋白的表达。通过蛋白质印迹和免疫染色证实了CILP蛋白在TG小鼠中的表达。当通过组织学证实椎间盘（髓核，环形纤维核）的结构（椎骨，环形纤维核）的结构时，对CILP TG小鼠的表型进行了分析，TG小鼠与Safranin-O的TG小鼠组的染色能力显着降低。此外，当通过MRI评估脊柱椎间盘时，人们认为与腰椎正常小鼠相比，腰椎间盘的亮度降低了。与正常小鼠相比，腰椎间盘的亮度降低了，并且椎间盘变性的进展显而易见。此外，TG和正常小鼠之间明显观察到腰椎X射线椎间盘高度的差异。在CILP TG小鼠中建立宫颈椎间盘退变和疝模型，发现当目前正在执行宫颈椎间盘变性和疝气时，当目前正在执行宫颈椎间盘的颈椎脊柱中的颈椎脊柱中的不稳定性时，目前正在进行宫颈椎间盘的X射线和组织学评估。

项目成果

Association study of COL9A2 with lumbar disc disease in the Japanese population

• DOI: 10.1007/s10038-006-0062-9
• 发表时间: 2006-01-01
• 期刊: JOURNAL OF HUMAN GENETICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Seki, Shoji;Kawaguchi, Yoshiharu;Ikegawa, Shiro
• 通讯作者: Ikegawa, Shiro

腰椎局所骨内および腸骨内におけるサイトカイン量の測定

腰椎和髂骨局部骨细胞因子水平的测量

• 发表时间: 2008
• 作者: 箭原康人;関庄二;川口善治;金森昌彦;阿部由美子;鈴木賀代;飯田充昭;木村友厚
• 通讯作者: 木村友厚

Fatal prognosis of an atypical meningioma in the cervical spine.

颈椎非典型脑膜瘤的致命预后。

• 发表时间: 2008
• 期刊: J Orthop Sci. 13
• 作者: Kawaguchi Y;Ishihara H;Abe Y;Seki S;et.al.
• 通讯作者: et.al.

OS Now instruction 6, Medical View, 2008.

OS Now 指令 6，医学观点，2008 年。

• 发表时间: 2008
• 作者: 川口善治;阿部由美子;関庄二;他
• 通讯作者: 他

A functional SNP in cartilage intermediate layer protein (CILP) is associated with susceptibility to lumbar disc disease

软骨中间层蛋白 (CILP) 中的功能性 SNP 与腰椎间盘疾病的易感性相关

• 发表时间: 2008
• 作者: Shoji Seki;Yoshiharu Kawaguchi;Kazuhiro Chiba;Yasuo Mikami;Futoshi Mio;Masaki Mori;Toshikazu Kubo;Yoshiaki Toyama;Tomoatsu Kimura;and Shiro Ikegawa
• 通讯作者: and Shiro Ikegawa