培養細胞を用いた慢性腰痛の発症機序に関する基礎的研究

利用培养细胞进行慢性腰痛发病机制的基础研究

• 批准号: 18689037
• 负责人: 大鳥 精司
• 金额: $ 12.56万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (A)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18689037/
• 关键词: 疼痛; 遺伝子; 神経根; 腰痛; 培養

腰痛は最も頻度の高い愁訴の一つであるが、時に慢性化し治療に難渋する場合も多い。我々はこれまで、疼痛発生機序として、線維輪周囲の神経が椎間板内部に進入(Nerve ingrowth)することを報告した。疼痛治療分野において、遺伝子治療の導入が試みられている。最近安全な遺伝子導入法として体外衝撃波にて効果的に筋組織、椎間板細胞、後根神経節細胞に遺伝子導入できることを示した。本研究はin vivo,in vitroにて椎間板のプロテオグリカンと変性椎間板より産生される神経栄養因子、炎症性サイトカイン、さらには神経のNerve ingrowthの関係を遺伝子導入の手法を用いて解明し、慢性腰痛発症の基礎的機序を解明することであった。主に椎間板細胞と後根神経節細胞を用いたin vitroでの検討を主体とした。1)ラット、マウス腰椎椎間板、ヒト椎間板を酵素処理後、単層培養を行った。2)次に胎生ラットより後根神経節を取り出し、同条件下に単層培養を行った。それらを混合培養し以下の実験を行った。3)培養椎間板に炎症性サイトカインであるtumor necrosis factor alpha(TNF alpha),IL-6を投与し、疼痛伝達物質(substance P, CGRP)の増加を免疫組織学的手法、ELISAにて確認した。それらの疼痛伝達物質、サイトカイン、神経栄養因子が培養後根神経節細胞を活性化しているかを神経突起の伸長度で調べ、特に、各種存在する神経栄養因子NGFが特に重要であることが判明した。4)以上の現象が各々の阻害剤で抑制されることを確認した。これらの研究を基盤とし、以上の現象を今後詳細に検討していく予定である。

腰痛是最常见的症状之一，但它通常是慢性的且难以治疗。我们之前曾报道过纤维环周围的神经侵入椎间盘作为疼痛产生的机制。在疼痛治疗领域，人们正在尝试引入基因疗法。最近，我们证明体外冲击波可以作为一种安全的基因转移方法，有效地将基因导入肌肉组织、椎间盘细胞和背根神经节细胞。本研究利用基因转移技术阐明体内外椎间盘蛋白多糖、退变椎间盘产生的神经营养因子、炎症细胞因子和神经向内生长之间的关系，旨在阐明其基本机制。我们主要集中于使用椎间盘细胞和背根神经节细胞的体外研究。 1)将大鼠、小鼠腰椎间盘和人椎间盘用酶处理并单层培养。 2)接下来，从胚胎大鼠中取出背根神经节，并在相同条件下进行单层培养。将它们混合培养并进行以下实验。 3)将肿瘤坏死因子α（TNFα）、炎性细胞因子IL-6给予培养的椎间盘，使用免疫组织学方法和ELISA确认疼痛递质（P物质、CGRP）的增加。我们研究了这些疼痛递质、细胞因子和神经营养因子是否根据神经突生长的程度激活培养的背根神经节细胞，并发现以各种类型存在的神经营养因子NGF尤为重要。 4)已确认上述现象被各抑制剂所抑制。基于这些研究，我们计划在未来详细研究上述现象。

项目成果

Substance P-saporin down-regulates substance P receptor immunoreactive sensory dorsal root ganglion neurons innervating the lumbar intervertebral discs in rats

• DOI: 10.1097/01.brs.0000250306.12996.fa
• 发表时间: 2006-12-15
• 期刊: SPINE
• 影响因子: 3
• 作者: Ohtori, Seiji;Inoue, Gen;Takahashi, Kazuhisa
• 通讯作者: Takahashi, Kazuhisa

Projection field of primary afferent fibers innervating the ventral portion of the lumbar intervertebral disc in the spinal cord dorsal horn.

支配脊髓背角腰椎间盘腹侧部分的初级传入纤维的投影场。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Anat Sci Int. 81.2
• 作者: Mizuno K;Kojima Y;Kurokawa S;Maruyama T;Sasaki S;Kohri K;Hayashi Y.;Takahashi Y
• 通讯作者: Takahashi Y