急性GVHD大腸上皮内Mn-SODの発現様相の病理学的解析及び傷害機構の解明

急性GVHD结肠上皮内Mn-SOD表达模式的病理分析及损伤机制的阐明

• 批准号: 07770170
• 负责人: 鈴木 美奈子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770170/
• 关键词: 急性GVHD; apoptosis; Mn-SOD; in situ hybridization; nick end labeling

副組織適合遺伝子のみが異なるマウス間で同種骨髄移植(BMT)を行い、致死的な急性GVHDを惹起しBMT後28日目までの大腸病変とapoptosis、更にMn-SODの発現との関わりについて解析した。(材料及び方法)レシピエントに放射線照射後、骨髄細胞と脾細胞をそれぞれ1.0×10^7個ずつ投与したものをGVHD群とし、骨髄細胞1.0×10^7個のみを投与したものBM群とした。大腸腺上皮傷害とapoptosisの関わりをみる為にレシピエントマウスを経時的に屠殺し、摘出した大腸組織を一部ホルマリン固定、パラフィン包埋後、nick end labeling染色、一部をPLP固定、OCTコンパウンド包埋後、Mn-SOD染色を行った。一方マウスのMn-SODmRNAに対する合成オリゴヌクレオチドプローブを作製し、in situ hybridizationを行った。(結果1)GVHD群では大腸腺上皮細胞間の浸潤細胞のピーク、また腺上皮傷害の程度に一致してnick end陽性所見がみられた。一方、BM群では、GVHD群と比較してピーク時において明らかにnick end陽性細胞は少なく腺上皮傷害もほとんどみられなかった。(結果2)Mn-SODの免疫組織化学の染色においては、GVHD群とBM群では陽性像が異なっており、その意義について現在検討中である。(結果3)Mn-SODのmRNAに対するビオチン化プローブにてin situ hybridizationを行ったが、良い結果が得られていない。原因としては、(1)Mn-SODのmRNAが発現していない、(2)用いたプローブが良くない、(3)RNaseにより目的mRNAが分解された、ことなどが考えられる。現在プローブを変えて検討中である。更に組織傷害が少ない、あるいは起こっていない臓器においても検討が必要である。

我们在仅辅助组织相容性基因不同的小鼠之间进行了同种异体骨髓移植（BMT），诱导致死性急性 GVHD，并分析了 BMT 后 28 天的结肠病变与细胞凋亡之间的关系以及 Mn-SOD 的表达。 (材料与方法) 受者照射后，GVHD组给予1.0×10^7骨髓细胞和脾细胞，BM组仅给予1.0×10^7骨髓细胞。为了检查结肠腺上皮损伤和细胞凋亡之间的关系，随着时间的推移处死受体小鼠，将切除的结肠组织部分固定在福尔马林中，包埋在石蜡中，切口末端标记染色，部分固定在PLP中，并包埋在OCT化合物中。 ，进行Mn-SOD染色。另一方面，制备小鼠Mn-SOD mRNA的合成寡核苷酸探针并进行原位杂交。 (结果1)GVHD组中，结肠腺上皮细胞间出现浸润细胞高峰，根据腺上皮损伤程度观察到缺口末端阳性结果。另一方面，在BM组中，与GVHD组相比，峰值时的切口末端阳性细胞明显较少，并且几乎没有观察到腺上皮的损伤。 (结果2)在Mn-SOD的免疫组织化学染色中，GVHD组和BM组的阳性图像不同，目前正在研究其意义。 (结果3) 使用生物素化探针对Mn-SOD mRNA进行原位杂交，但未获得良好的结果。可能的原因包括（1）Mn-SOD mRNA不表达，（2）使用的探针不好，​​（3）目标mRNA被RNase降解。我们目前正在考虑更换探头。此外，有必要考虑很少或没有组织损伤的器官。