肝再生ならびに肝疾患時におけるビトロネクチンの糖鎖構造変化と組織修復の調節

玻连蛋白在肝再生和肝病过程中聚糖结构变化和组织修复的调节

基本信息

批准号：
07J12995
负责人：
佐野琴音
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Ochanomizu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

肝再生時に産生されるビトロネクチン(VN)の糖鎖構造変化に伴う分子の高次構造変化が、細胞接着伸展活性や細胞周囲での局所的溶解反応に及ぼす影響を明らかにした。非手術(NO)、シャム手術(SH)、または部分肝切除手術から24時間後(PH)のラット血漿からVNを精製した。VNのGlu-C消化糖ペプチドをLC/MS^n解析した結果、VNと同様に肝臓で主に産生されるフィブロネクチンには見られない混成型糖鎖を含む部位特異的なN-型糖鎖付加と、タンデムなオリゴシアル酸構造を持つO-型糖鎖の存在を見出した。このオリゴシアル酸糖鎖がPH-VNで著しく減少することにより、分子の等電点が大きく塩基性シフトすることを見出した。これらのVN糖鎖変化か細胞接着に及ぼす影響を探るため、肝炎症時に活性化して細胞外マトリックスを産生する肝星細胞(RSC)を用いて細胞接着伸展活性測定とシグナル伝達活性測定を行った。その結果、NO-,SH-VNを基質とする場合と比較してPH-VN上での伸展が50%減少し、細胞内のFocal adhesion kinaseのチロシンリン酸化レベルが約60%に低下することを見出した。またノイラミニダーゼ処理VN上でも同様にRSC伸展が激減したことから、VN糖鎖中のシアル酸がRSCのインテグリン仲介性接着伸展に寄与することが示された。またVNと1型プラスミノゲン活性化因子阻害因子(PAI-1)の共存下におけるウロキナーゼ(uPA)有効活性はPH-VNで増加したが、さらに部分肝切除手術72時間後の血漿中のプラスミン活性はRSC存在下で著しく増強されることを見出した。これはRSC表面に存在するuPA受容体へのVNの結合活性の増強により、局所的な溶解反応が促進されるためと考えられた。VNの糖鎖変化による組織修復の調節機構を解明することは、正常な修復または線維化進展の制御に繋がると考えられる。

我们已经阐明了与肝脏再生过程中产生的玻染素构象变化（VN）对细胞粘附延伸活性和细胞周围局部裂解反应有关的分子的高阶构象变化的影响。非手术（NO），假手术（SH）或部分肝切除手术（pH）后24小时从大鼠血浆中纯化VN。 As a result of LC/MS^n analysis of the Glu-C digestive glycopeptide of VN, we discovered site-specific N-type glycan addition containing hybrid glycans not found in fibronectin, which is mainly produced in the liver, as well as the presence of O-type glycans with a tandem oligosialic acid structure.发现在pH-VN中，寡聚酸糖链显着降低，从而导致分子的等电点的基本变化很大。为了研究这些变化在VN糖基因或细胞粘附中的影响，使用肝脏恒星细胞（RSC）测量细胞粘附延伸活性和信号传导活性，这些细胞在肝炎期间被激活并产生细胞外基质。结果，我们发现与使用NO-和SH-VN用作底物的情况相比，pH-VN上的扩展降低了50％，并且细胞内粘着剂激酶的酪氨酸磷酸化水平降低至约60％。此外，同样，在经神经氨酸酶处理的VNS上大大减少了RSC扩展，这表明VN糖链中的唾液酸有助于整联蛋白介导的RSC的粘附扩展。此外，尽管在pH-VN中增加了VN和1型纤溶酶原激活剂抑制剂（PAI-1）的有效尿激酶（UPA）活性在PH-VN中增加，但在部分肝切除术后RSC的存在下，血浆中血浆活性显着增强。这被认为是因为VN与RSC表面上存在的UPA受体的结合活性促进了局部裂解反应。人们认为，由于VNS糖基化的变化，阐明组织修复的调节机制会导致正常修复或控制纤维化进展。