クルマエビの初期免疫応答関連遺伝子の探索と疾病防除のためのバイオマーカーの開発

寻找虎虾早期免疫反应相关基因并开发疾病控制生物标志物

• 批准号: 07J11356
• 负责人: 米加田 徹
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J11356/
• 关键词: Toll受容体; 異物認識機構; クルマエビ; RNA干渉法; 発現解析; シグナル伝達; IMD; ALF; 生体防御; 自然免疫機構; シグナル伝達機構; Toll receptor

クルマエビ異物認識機構関連因子として、Toll受容体、Serpin、Snake、Spatzle、ECSIT、TRAF6、Cactin、LGBP、また抗菌ペプチドとしてALF、Penaeidin、Crustinおよびlysozymeなどの同定を行ってきた。そこで、RNA干渉法によるToll受容体ノックダウン後の各因子の発現解析により、Toll受容体と各因子の関連性の解明を行った。クルマエビでは2種類のToll受容体遺伝子(MjToll,MjToll2)が同定されており,それぞれのToll受容体に対しdsRNAの作製を行った。各Toll受容体をノックダウンしたクルマエビの血リンパよりcDNAを合成し,免疫関連因子およびEF1-α遺伝子のSYBR GreenリアルタイムPCRを行った。MjTollをノックダウンしたcDNAを用いた結果、PBsを接種したクルマエビと比べ、ProPOで73倍およびLGBPで70倍の高い発現上昇が認められ、lysozymeで10%、血液凝固因子およびSpatzleで0.1%以下の発現が認められた。また、ALF2、Crustin、PenaeidinおよびTRAF6においては3.1～5.6倍の発現上昇が認められ、ECSIT、CactinおよびALFは50%以下の発現量であった。一方、MjToll2をノックダウンしたcDNAを用いた結果、PBSを接種したクルマエビと比べ、ProPOで168倍およびALF2で510倍の発現上昇が認められ、lysozymeおよび血液凝固因子で10%以下、Spatzleで0.1%以下の発現が認められた。また、LGBP、Crustin、Penaeidin、SnakeおよびSerpinにおいては1.4～5.9倍の発現上昇が認められ、TRAF6、ECSIT、CactinおよびALFは50%以下の発現量であった。

Toll受体、Serpin、Snake、Spatzle、ECSIT、TRAF6、Cactin、LGBP以及抗菌肽如ALF、Penaeidin、Crustin和溶菌酶已被确定为与虾异物识别机制相关的因子。因此，我们通过RNA干扰法分析Toll受体敲低后各因子的表达量，阐明Toll受体与各因子的关系。在虎虾中已鉴定出两种类型的Toll受体基因（MjToll和MjToll2），并为每种Toll受体制备了dsRNA。从Toll受体被敲低的虎虾血淋巴中合成cDNA，并对免疫相关因子和EF1-α基因进行SYBR Green实时PCR。使用MjToll敲低cDNA的结果是，与接种PB的虾相比，观察到ProPO的表达增加了73倍，LGBP的表达增加了70倍，溶菌酶增加了10％，而LGBP的表达增加了不到0.1％对于凝血因子和 Spatzle 的表达。此外，ALF2、Crustin、Penaeidin 和 TRAF6 的表达水平增加了 3.1 至 5.6 倍，ECSIT、Cactin 和 ALF 的表达水平低于 50%。另一方面，使用MjToll2被敲低的cDNA的结果是，与接种PBS的虾相比，发现ProPO的表达增加了168倍，ALF2的表达增加了510倍，而溶菌酶和凝血酶的表达增加了不到10%因子，并且观察到 Spatzle ％或更少的表达。此外，观察到 LGBP、Crustin、Penaeidin、Snake 和 Serpin 的表达增加了 1.4 至 5.9 倍，而 TRAF6、ECSIT、Cactin 和 ALF 的表达水平低于 50%。

项目成果

リアルタイムLAMP法によるノロウイルス検出

使用实时 LAMP 方法检测诺如病毒

• 发表时间: 2008
• 期刊: 第45回環境工学研究フォーラム講演集
• 作者: Mori H;Nakaya M;Yoshimura A;et. al.;中谷真子;Mari Inada;Tohru Mekata;Tohru Mekata;Tohru Mekata;Tomoya Kono;Tohru Mekata;Raja Sudhakaran;Yoshihiro Suzuki;鈴木祥広;Raja Sudhakaran;鷺巣勇士;成松将吾
• 通讯作者: 成松将吾

Expression analysis of antimicrobial peptide genes in Kuruma shrimp treated with DNA vaccine against white spot disease virus

白斑病病毒DNA疫苗处理车虾抗菌肽基因表达分析

• 发表时间: 2009
• 作者: M. Sakai;Y. Shibata;T. Kono;Y. Kitao;T. Mekata and T. Itami;米加田徹;稲田真理;吉峰槙;Nguyen Thi Hue Linh;西純市;Toshiaki Itami;Raja Sudhakaran;Yoshihiro Suzuki;Masahiro Sakai
• 通讯作者: Masahiro Sakai

クルマエビのSTAT(signal transducers and activators of transcription)遺伝子

车虾 STAT（信号转导和转录激活因子）基因

• 发表时间: 2009
• 作者: M. Sakai;Y. Shibata;T. Kono;Y. Kitao;T. Mekata and T. Itami;米加田徹;稲田真理;吉峰槙;Nguyen Thi Hue Linh;西純市;Toshiaki Itami;Raja Sudhakaran;Yoshihiro Suzuki;Masahiro Sakai;奥川翔吾
• 通讯作者: 奥川翔吾

閉鎖循環式養殖システムにおけるクルマエビの産卵行動試験

闭路循环养殖系统对虾产卵行为试验

• 发表时间: 2008
• 期刊: 第45回環境工学研究フォーラム講演集
• 作者: Mori H;Nakaya M;Yoshimura A;et. al.;中谷真子;Mari Inada;Tohru Mekata;Tohru Mekata;Tohru Mekata;Tomoya Kono;Tohru Mekata;Raja Sudhakaran;Yoshihiro Suzuki;鈴木祥広;Raja Sudhakaran;鷺巣勇士
• 通讯作者: 鷺巣勇士

A simple non-enzymatic method for the preparation of white spot syndrome virus (WSSV) DNA from the hemolymph of Marsupenaeus japonicus using FTA matrix cards

一种使用 FTA 矩阵卡从日本对虾血淋巴中制备白斑综合症病毒 (WSSV) DNA 的简单非酶法

• 发表时间: 2009
• 期刊: Journal of Fish Diseases (印刷中)
• 作者: R. Sudhakaran;T. Mekata;T. Kono;K. Supamattaya;N. T. H. Linh;Y. Suzuki;M. Sakai;T. Itami
• 通讯作者: T. Itami