ミニブタ体細胞クローン個体を用いたクローン胚由来胚性幹細胞移植モデル系の構築

利用小型猪体细胞克隆构建克隆胚胎来源的胚胎干细胞移植模型系统

• 批准号: 07J11168
• 负责人: 杉村 智史
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J11168/
• 关键词: ミニブタ; 体細胞核移植; 胚性幹細胞; 体外発生培養

本研究では高品質なミニブタ体細胞クローン胚を作製し,その胚よりGFP遺伝子導入した多能性胚性幹細胞を樹立するとともに,作出したクローン個体にその樹立した細胞を移植することで自家細胞由来胚性幹細胞移植モデルミニブタの開発を目的としている。研究最終年度は,高品質なミニブタ体細胞クローン胚盤胞期胚を作製すると共に,それに由来する多能性胚性細胞の樹立を目的とした。1)体外発生培地の改良において,ブタ体外発生培地として一般的に使用されているNCSU-23を用いた場合に比べ,ブタ卵管液の組成を基に作成した体外発生培地であるPZM-5にBSAを添加したmPZM-5を用いることで胚盤胞形成率およびアポトーシス出現率が改善されることを明らかにした。2)4細胞期においてミニブタSCNT胚3個を集合させることで内部細胞塊(ICM)および栄養外胚葉(TE)細胞数が増加し,更に未分化マーカーであるOct3/4発現細胞の割合が増加することを明らかにした。3)電気化学的細胞呼吸測定技術を開発し,その技術を用いた新規非侵襲的SCNT胚の品質評価技術を確立した。これにより,これまで不可能であったSCNT胚の生理学的アプローチによる高品質胚の選択を可能にした。4)今回開発しか技術により得られた高品質ミニブタSCNT胚に由来する多能性細胞の樹立を試みたところ,未分化状態を維持していると思われる細胞コロニーが出現し,そのコロニーは2継代目まで観察された。以上,本研究で開発したミニブタSCNT胚作出技術は高品質な胚を獲得するうえで極めて画期的な技術であること,さらにSCNT胚に由来する多能性胚性細胞の樹立には胚の品質が大きく影響することを明らかにした。

在这项研究中，我们创建了高质量的小型猪体细胞克隆胚胎，利用从胚胎中引入的GFP基因建立了多能胚胎干细胞，并将建立的细胞移植到创建的克隆个体中，以获得自体细胞来源。开发用于胚胎干细胞移植的小型猪模型。在研究的最后一年，我们的目标是创造高质量的小型猪体细胞克隆囊胚期胚胎，并建立源自它们的多能胚胎细胞。 1）在改进体外发育培养基方面，基于猪输卵管液成分创建的体外发育培养基PZM-5比常用的猪体外发育培养基NCSU-23更有效。结果表明，使用补充有 BSA 的 mPZM-5 可以提高囊胚形成率和凋亡出现率。 2）通过在4细胞阶段聚集三个小型猪SCNT胚胎，内细胞团（ICM）和滋养外胚层（TE）细胞的数量增加，并且表达未分化标记物Oct3/4的细胞比例增加。会的。 3）我们开发了一种电化学细胞呼吸测量技术，并利用该技术建立了一种新的SCNT胚胎无创质量评估技术。这使得使用 SCNT 胚胎的生理学方法选择高质量胚胎成为可能，这在以前是不可能的。 4)当我们尝试建立来自使用新开发的技术获得的高质量小型猪SCNT胚胎的多能细胞时，观察到出现了似乎保持未分化状态的细胞集落；如上所述，本研究开发的小型猪SCNT胚胎生产技术是获得高质量胚胎的一项极具创新性的技术，而且，有必要建立由SCNT胚胎衍生的多能胚胎细胞，这表明质量具有很大的影响。影响。

项目成果

ミニブタ体細胞クローン個体作出成功に関わる要因解析.

小型猪体细胞克隆成功的相关因素分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 佐藤英明;杉村智史;田中穂積;小林英司.
• 通讯作者: 小林英司.

呼吸量を指標としたブタ体外受精胚の品質評価と胚発生能について.

以呼吸频率和胚胎发育潜力为指标的猪体外受精胚胎质量评价

• 发表时间: 2008
• 作者: 横尾正樹;杉村智史;佐藤英明;阿部宏之.
• 通讯作者: 阿部宏之.

電気化学的単一呼吸能解析システムを利用した体細胞核移植胚のミトコンドリア機能解析

利用电化学单呼吸能力分析系统分析体细胞核移植胚胎的线粒体功能

• 发表时间: 2008
• 作者: 杉村智史;横尾正樹;山中賢一;阿部宏之;佐藤英明
• 通讯作者: 佐藤英明

Interspecies somatic cell nuclear nuclear transfer with porcine oocytes as recipients : A novel bioassay system for assessing the competence of canine somatic cells to develop into embryos

以猪卵母细胞为受体的种间体细胞核移植：一种用于评估犬体细胞发育成胚胎能力的新型生物测定系统

• 发表时间: 2009
• 期刊: Theriogenology (印刷中)
• 作者: Sugimura S;Narita K;Yamashiro H;Sugawara A;Shoji T;Terashita Y;Nishimori K;Konno T;Yoshida M;Sato E
• 通讯作者: Sato E

Birth of somatic cell nuclear transfer (SCNT) cloned miniature piglet following co-transfer of parthenogenetic embryos

孤雌胚胎共移植后体细胞核移植（SCNT）克隆小型仔猪的诞生

• 发表时间: 2009
• 期刊: Tohoku Journal Agricultural Research 59
• 作者: Sugimura S;Yamanaka KI;Wakai T;Kawahara M;Tanaka H;Kobayashi J;Kobayashi E;Sato E
• 通讯作者: Sato E