小脳の生後発達における、巨大分泌蛋白質リーリンの機能

巨分泌蛋白Reelin在小脑出生后发育中的作用

基本信息

批准号：
07J10094
负责人：
日比輝正
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までで、リーリンとアルカリフォスファターゼとの融合蛋白質により、生後小脳では内顆粒細胞がリーリンを受容し、プルキンエ細胞は受容しないことが分かった。これまでプルキンエ細胞がリーリン受容細胞だと予想されていたため、プルキンエ細胞のリーリン受容能を時間を追って解析すると、誕生直後にはリーリン受容能があるが、細胞表面への移動と共に受容能が低下し、出生直前に一列に整列する時点では受容能が無いことが分かった。一方リーリン欠損マウスでは、生後でもプルキンエ細胞はリーリン受容能を有していた。つまり、プルキンエ細胞のリーリン受容能の消失は、リーリンにより受容体がダウンレギュレーションされることが原因だと考えられた。他方、胎生期の顆粒細胞はリーリン受容能を持たないことも明らかとなり、生後小脳の内顆粒細胞が有するリーリン受容能は、細胞移動よりもむしろ神経ネットワーク形成に関与する可能性が示唆された(投稿中)。また、前年度に、小脳にはリガンド結合ドメインの異なる複数のApoER2アイソフォームがあり、リーリンへの結合性に違いがあることを明らかにした。そこで、その1つであるLA12378-ApoER2のみを認識する抗体を作製した。この抗体による免疫染色から、生後小脳ではLA12378-ApoER2が内顆粒層にのみ発現することが明らかとなった(Neurosci.Res.,2009)。更に、前年度に明らかにした、ApoER2依存的なリーリンN末端断片の再分泌についても追究を行ない、この現象がRab11依存的な輸送経路によることが明らかになった(FEBS Lett.,in press)。

直到前一年，人们发现Reelin和碱性磷酸酶的融合蛋白可以让出生后小脑的内部颗粒细胞接受Reelin，但浦肯野细胞却不能。到目前为止，浦肯野细胞被预测为Reelin受体细胞，因此当我们分析浦肯野细胞随时间变化的Reelin受体能力时，我们发现它们在出生后立即具有Reelin受体能力，但随着它们移动到细胞内，受体能力下降表面上看，人们在出生前排队时发现他们不接受。另一方面，在 Reelin 缺陷的小鼠中，浦肯野细胞即使在出生后也具有 Reelin 接受能力。换句话说，浦肯野细胞中Reelin受体能力的丧失被认为是由于Reelin受体下调所致。另一方面，也揭示胚胎颗粒细胞不具有Reelin感受能力，提示出生后小脑内部颗粒细胞的Reelin感受能力可能参与神经网络形成而不是细胞迁移（（目前）正在发布）。此外，去年我们发现小脑中存在多种具有不同配体结合结构域的ApoER2亚型，它们与Reelin具有不同的结合特性。因此，我们创建了一种仅识别其中一个 LA12378-ApoER2 的抗体。使用该抗体进行的免疫染色显示，LA12378-ApoER2 仅在出生后小脑的内核层中表达（Neurosci.Res.，2009）。此外，我们研究了去年发现的 Reelin N 末端片段的 ApoER2 依赖性再分泌，发现这种现象是由于 Rab11 依赖性转运途径所致（FEBS Lett.，出版中）。