小脳の生後発達における、巨大分泌蛋白質リーリンの機能

巨分泌蛋白Reelin在小脑出生后发育中的作用

基本信息

批准号：
07J10094
负责人：
日比輝正
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までで、リーリンとアルカリフォスファターゼとの融合蛋白質により、生後小脳では内顆粒細胞がリーリンを受容し、プルキンエ細胞は受容しないことが分かった。これまでプルキンエ細胞がリーリン受容細胞だと予想されていたため、プルキンエ細胞のリーリン受容能を時間を追って解析すると、誕生直後にはリーリン受容能があるが、細胞表面への移動と共に受容能が低下し、出生直前に一列に整列する時点では受容能が無いことが分かった。一方リーリン欠損マウスでは、生後でもプルキンエ細胞はリーリン受容能を有していた。つまり、プルキンエ細胞のリーリン受容能の消失は、リーリンにより受容体がダウンレギュレーションされることが原因だと考えられた。他方、胎生期の顆粒細胞はリーリン受容能を持たないことも明らかとなり、生後小脳の内顆粒細胞が有するリーリン受容能は、細胞移動よりもむしろ神経ネットワーク形成に関与する可能性が示唆された(投稿中)。また、前年度に、小脳にはリガンド結合ドメインの異なる複数のApoER2アイソフォームがあり、リーリンへの結合性に違いがあることを明らかにした。そこで、その1つであるLA12378-ApoER2のみを認識する抗体を作製した。この抗体による免疫染色から、生後小脳ではLA12378-ApoER2が内顆粒層にのみ発現することが明らかとなった(Neurosci.Res.,2009)。更に、前年度に明らかにした、ApoER2依存的なリーリンN末端断片の再分泌についても追究を行ない、この現象がRab11依存的な輸送経路によることが明らかになった(FEBS Lett.,in press)。

直到上一年，人们发现reelin和碱性磷酸酶之间的融合蛋白使内部颗粒细胞接受reelin和Purkinje细胞不接受产后小脑中。到目前为止，预计普尔金派细胞是reelin受体细胞，当普kinje细胞分析了随着时间的流逝，purkinje细胞分析了reelin的可接受性时，发现它们在出生后立即可接受可接受性，但是当它们迁移到细胞表面时，它们的可接受性下降，并且在出生前的一条线时没有它们。另一方面，在reelin不足的小鼠中，即使出生后，浦肯野细胞也能够接受。换句话说，人们认为，reelin在浦肯野细胞中的可接受性丧失是由reelin下调受体引起的。另一方面，已经揭示了胚胎颗粒细胞没有接收reelin的能力，这表明在产后小脑中接受内部颗粒细胞接收re林的能力可能参与神经网络形成，而不是细胞迁移（邮政）。在上一年，我们还透露了小脑中有多种具有不同配体结合域的ApoER2同工型，它们在结合特性与reelin的结合特性不同。因此，制备了仅识别其中一种la12378-apoer2的抗体。用这种抗体进行免疫染色表明，LA12378-APOER2仅在产后小脑的内颗粒层中表达（Neurosci.res。，2009）。此外，我们还研究了上一年揭示的heling n末端片段的apoer2依赖性重分泌，并揭示了这种现象是由Rab11依赖性的运输途径引起的（FEBS Lett。，在Press中）。