ゼブラフィッシュ内胚葉性器官の形成異常を示すimsetyの責任遺伝子の機能解析

负责 imsety 的基因的功能分析，显示斑马鱼内胚层器官的畸形

• 批准号: 07J02801
• 负责人: 穂積 俊矢
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07J02801/
• 关键词: 内胚葉性器官; ゼブラフィッシュ; microRNA; p53; 内胚葉; 細胞死

本年度は、imsetyと同様に内胚葉性器官の発生に異常を示すmorendo(mor)変異体の解析を重点的に行った。<1.Morタンパク質の細胞内局在>Morタンパク質が機能する細胞内領域を調べるため、FLAGペプチドで標識したMorタンパク質をゼブラフィッシュ胚で発現させ、抗FLAG抗体を用いて抗体染色を行った。その結果、Morタンパク質は核に局在することが明らかとなった。<2.microRNAのプロセシングの観察>Morタンパク質がmicroRNAの生合成に機能していることが予想された。microRNAとは、20数baseの小分子RNAで、翻訳阻害を行うことが報告されている。mor変異体で、microRNAの生合成過程の異常を調べるために、内胚葉性器官で発現するmicroRNAを、Northern blottingや半定量的RT-PCRで検出したところ、MicroRNAの前駆体が減少していることが明らかとなった。<3.Morタンパク質の機能ドメインの探索>Morタンパク質は幾つかのドメインを有している。Morタンパク質の機能を詳細に理解するために、いくつかのドメインに変異を挿入した変異型Morタンパク質をmor変異体に発現させ、表現型の回復の有無により、Morタンパク質のmicroRNA生合成に機能するドメインを探索した。その結果、ATP結合ドメインがMorタンパク質の機能に必要であることが示唆された。これら3つの結果から、Morタンパク質は核内で、ATPの分解によるエネルギーを用いて、microRNA前駆物質の転写または維持・安定化に機能していることが予想される。

今年，我们重点分析了 Morendo (mor) 突变体，该突变体与 imsety 一样，在内胚层器官发育中表现出异常。 <1.Mor蛋白的细胞内定位> 为了研究Mor蛋白发挥功能的细胞内区域，在斑马鱼胚胎中表达标记有FLAG肽的Mor蛋白，并使用抗FLAG抗体进行抗体染色。结果表明Mor蛋白定位于细胞核。 <2.microRNA加工的观察> 预测Mor蛋白在microRNA生物发生中发挥作用。 MicroRNA是一种约20个碱基的小分子RNA，有报道称其抑制翻译。为了检查 mor 突变体中 microRNA 生物发生过程的异常，我们使用 Northern blotting 和半定量 RT-PCR 检测了内胚层器官中表达的 microRNA，并发现 microRNA 前体明显减少。 <3. Mor蛋白功能结构域的寻找> Mor蛋白有多个结构域。为了详细了解Mor蛋白的功能，我们表达了在mor突变体中插入多个结构域的突变Mor蛋白，并根据我搜索的结构域的表型恢复来确定Mor蛋白是否在microRNA生物发生中发挥作用。 。结果表明 ATP 结合域是 Mor 蛋白功能所必需的。这三个结果表明 Mor 蛋白利用 ATP 降解的能量在细胞核中 microRNA 前体的转录、维持和稳定中发挥作用。

项目成果

Roles of type1 myosins in Drosophila handedness

1 型肌球蛋白在果蝇惯用手中的作用

• 发表时间: 2007
• 期刊: Fly 1(5)
• 作者: 菱田 真史;瀬戸 秀紀;吉川 研一;Taniguchi K;Taniguchi K
• 通讯作者: Taniguchi K

Analysis of zebrafish mutant morendo showing defects of the digestive organ formation.

斑马鱼突变体莫伦多的分析显示消化器官形成的缺陷。

• 发表时间: 2009
• 作者: Shunya Hozumi;Ryo Hirabayashi;Akio Yoshizawa;Tohru Ishitani;Makiko Tsutsumi;Atsushi Kuroiwa;Motoyuki Itoh;Yutaka Kikuchi
• 通讯作者: Yutaka Kikuchi

D-JNK signaling in visceral muscle cells controls the laterality of the Drosophila gut.

• DOI: 10.1016/j.ydbio.2007.08.048
• 发表时间: 2007-11
• 期刊: Developmental biology
• 影响因子: 2.7
• 作者: Kiichiro Taniguchi;Shunya Hozumi;Reo Maeda;Masashi Ooike;Takeshi Sasamura;T. Aigaki;K. Matsuno

Analysis of zebrafish mutant morendo showing defects of the digestive organs

斑马鱼突变体莫伦多分析显示消化器官缺陷

• 发表时间: 2008
• 作者: M.Hishida;H.Seto;N.L.Yamada;K.Yoshikawa;Shunya Hozumi;穂積俊矢;Hozumi S
• 通讯作者: Hozumi S

ゼブラフィッシュの内胚葉性器官に異常を示すmorendo変異体の解析

斑马鱼内胚层器官异常的莫伦多突变体分析

• 发表时间: 2009
• 作者: M.Hishida;H.Seto;前田礼男;穂積俊矢;穂積俊矢
• 通讯作者: 穂積俊矢