上皮細胞特異的な細胞膜の脂質非対称性の維持機構とその細胞機能に果たす役割

上皮细胞特异性细胞膜脂质不对称的维持机制及其在细胞功能中的作用

基本信息

批准号：
07J01809
负责人：
池ノ内順一
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

私は上皮間葉転換(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)という現象に着目し研究をすすめている。EMTとは、上皮細胞が隣接する上皮細胞との接着を失い、上皮細胞の性質を喪失する一方で、遊走性を獲得し間葉細胞としての性質を獲得する現象である。以前の研究で、転写因子Snailを培養上皮細胞に強制的に発現することにより間葉細胞に転換しうることを見出した。上皮細胞と、Snai1によって間葉細胞に転換した細胞は、由来を同一にしており、上皮細胞と間葉細胞を網羅的比較する上でとても良い実験系であると考えられる。Snailを用いてマウスの培養上皮細胞を間葉状細胞へ形質転換した細胞と、元の上皮細胞を用いて、上皮細胞が間葉細胞に転換される際に発現の著しく低下する遺伝子の探索をマイクロアレイを用いて行った。その結果、Snailが複数の上皮細胞特異的な遺伝子の発現を抑制しているという実験結果を得た。上皮細胞に特異的に発現する遺伝子リストのなかで、4回膜タンパク質について局在スクリーニングを行った結果、3つの上皮細胞がつくる細胞接着に濃縮する蛋白質(トリセルリン)を同定することができた。学術振興会PD期間中には、上皮細胞と間葉細胞では細胞膜を構成する脂質、脂質代謝物が異なるという予備的な結果を得ることができた。また並行して、上皮細胞にのみに発現する脂質代謝酵素や脂質結合タンパク質のクローニングをすすめた。具体的には先のマイクロアレイの結果を活用し、上皮細胞特異的に発現する脂質結合タンパク質の細胞内の局在を指標にスクリーニングを行った。そのうちいくつかについては、興味深い細胞内局在を示したので、さらに、その機能をさぐるため、抗体および機能阻害実験を行った。現在さらに詳細な解析を行っている。

我继续研究上皮 - 间质转变（EMT）的现象。 EMT是一种现象，上皮细胞会失去对相邻上皮细胞的粘附，虽然它们失去上皮细胞的特性，但它们会获得迁移和间质细胞的特性。先前的研究发现，转录因子蜗牛可以通过在培养的上皮细胞上强行表达到间充质细胞。通过SNAI1转化为间充质细胞的上皮细胞和细胞具有相同的起源，被认为是一个非常好的实验系统，用于全面比较上皮细胞和间质细胞。使用微阵列，从培养的小鼠上皮细胞转化为间质细胞和原始上皮细胞的细胞，我们使用微阵列搜索当将上皮细胞转化为间质细胞时，其表达显着降低。结果，我们获得了实验结果，表明蜗牛抑制了多个上皮细胞特异性基因的表达。在上皮细胞中特异性表达的基因列表中，我们对膜蛋白进行了四次的定位筛选，因此，我们能够鉴定出浓缩由三个上皮细胞产生的细胞粘附的蛋白（Tricerlin）。在促进科学学会的PD期间，获得了构成细胞膜的脂质和脂质代谢产物的初步结果，在上皮细胞和间质细胞之间有所不同。此外，我们还促进了仅在上皮细胞中表达的脂质代谢酶和脂质结合蛋白的克隆。具体而言，使用先前微阵列的结果，使用特异性在上皮细胞中特异性表达的脂质结合蛋白的细胞内定位进行筛选。其中一些显示出有趣的亚细胞定位，并进行了进一步的抗体和功能抑制实验以探索其功能。我们目前正在进行更详细的分析。