生殖腺と脳下垂体特異的遺伝子発現調節領域の解析を基盤とする性分化異常症の解明

基于性腺和垂体特异性基因表达调控区的分析阐明性分化障碍

• 批准号: 18790644
• 负责人: 嶋 雄一
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: National Institute for Basic Biology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790644/
• 关键词: 生殖腺; 脳下垂体; 発生; 転写; エンハンサー; Ad4BP; SF-1; Leydig細胞; 性分化異常症

1.トランスジェニックマウスを用いてAd4BP/SF-1遺伝子の生殖腺特異的な転写調節領域を探索した結果、転写開始点の約5kb上流に胎児型Leydig細胞に特異的な発現を誘導する活性を持つDNA断片を同定した。この断片によって誘導されるLacZの発現は胎齢13.5日以降のオス生殖腺の間質に認められ、Leydig細胞のマーカーである3beta-HSDとの二重免疫染色によりLeydig細胞に特異的な発現であることを証明した。興味深いことに、このエンハンサーは胎児型のLeydig細胞のみで機能を発揮し、成獣型のLeydig細胞においては活性を示さなかった。今後、エンハンサー領域の塩基配列を詳細に解析することにより、Leydig細胞の分化メカニズムを遺伝子の発現調節機構という観点から理解することが可能になると予想される。2.脳下垂体に関しては、既に我々が同定しているエンハンサー領域の解析から、bicoid-related homeoproteinに分類されるPitx2がエンハンサーとの結合を介して直接的にAd4BP/SF-1の転写を活性化していることが証明され、Molecular Endocrinology誌に投稿した。さらに、Pitx2結合配列以外にも、このエンハンサーの内部に機能的に重要な配列(コア・エレメント)を同定したので、現在酵母one-hybrid法を用いてこれらの配列に結合可能な転写因子のスクリーニングを行っている。3.転写調節機構の破綻を病因とする性分化異常症の存在を予想して、Hypogonadotropic hypogonadism患者由来のゲノムDNAを用いて脳下垂体特異的エンハンサー領域の変異検索を行ったが、現在までのところ変異は検出されていない。Leydig細胞特異的エンハンサーの解析は、共同研究者の緒方勤(国立成育医療センター研究部長)により現在進行中である。今後、さらに多数の患者のゲノムを対象に、解析を続ける予定である

1。我们使用转基因小鼠搜索了AD4BP/SF-1基因的性腺特异性转录调控区域，并鉴定出具有活性的DNA片段，这些活性诱导了转录起始点上游约5 kb的胎儿Leydig细胞的表达。该片段诱导的LACZ的表达在胎龄13.5天后在雄性性腺的基质中发现，并用Leydig细胞的标记3Beta-HSD进行双重免疫染色，证明了它在Leydig细胞中特别表达。有趣的是，该增强子仅施加在胎儿leydig细胞上，并且在成年leydig细胞中不活跃。将来，预计通过详细分析增强剂区域的基本序列，可以从基因表达调节机制的角度了解Leydig细胞分化的机制。 2。关于垂体，我们已经确定的对增强子区域的分析证明，被归类为与双子体相关的同音蛋白的PITX2直接通过与增强剂结合直接激活AD4BP/SF-1转录，并且已提交给分子内分泌学。此外，除了PITX2结合序列外，在该增强子中已经确定了功能上重要的序列（核心元素），并且目前使用酵母单杂交方法筛选了可以结合到这些序列的转录因子。 3。为了预测性功能障碍的存在，这是由转录调节机制的分解引起的，我们使用垂体性特异性增强子区域进行了突变搜索，该突变使用了垂体性特异性增强子区域，该突变型使用基因组性DNA的性DNA，但未检测到未检测到的突变。合作者Ogata Tsutomu（国家儿童保健中心研究总监）目前正在进行对Leydig细胞特异性增强剂的分析。我们计划将来继续对更多患者的基因组进行分析。