肝細胞分化の分子機構の解析と致死的肝不全モデル動物への細胞移植療法の開発

肝细胞分化的分子机制分析及致死性肝衰竭模型动物细胞移植治疗的发展

基本信息

批准号：
18790444
负责人：
柿沼晴
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790444/
关键词：
再生医学肝細胞幹細胞発生・分化細胞移植 Wnt経路 TCF

项目摘要

我々は当該研究において、純化した初代肝幹/前駆細胞を用いて肝細胞分化に関わる分子機構を解析し、その結果をもとに、致死的肝疾患モデルマウスを肝幹細胞の移植によって救命する細胞移植モデルを開発する研究を行い、今年度の成果として下記を得た。(1).マウス肝幹/前駆細胞の分離、分化誘導培養系の確立・改良:平成18年度より継続して施行した。さらに、胆管細胞への分化誘導系も導入し、安定したbranching formationを得た。(2).肝細胞分化の分子機構の探索:肝前駆細胞における転写因子TCFの機能を解析するためdnTcf-4を強制発現させて肝幹/前駆細胞への影響を解析した。dnTcf-4群では肝細胞への分化と増殖の双方が明瞭に抑制された(第43回日本肝臓学会総会などで報告)。さらに転写因子Prox1が肝前駆細胞の増殖に関与することを示した(Hepatology, in press)。(3).肝不全モデルマウスヘの細胞移植実験系の確立:野生型マウスを用いた細胞移植実験系の確立を行ってきたが、放射線照射と肝切除を組み合わせた前処置によって、野生型マウスにも細胞移植の効果を判定できる系を確立した。(4).肝不全モデルマウスヘの肝幹/前駆細胞の移植:この結果に基づき、肝幹/前駆細胞に対してdnTcf-4を強制発現させ、その細胞を移植することで移植効果の差について検討したところ、肝幹/前駆細胞の増殖能をTCFが制御していることをin vivoでも示した(第11回日本肝臓学会大会で報告)。(5).新たな肝不全モデルマウスヘの細胞移植系の構築:さらに新規移植モデルの構築を行い、薬物投与と肝切除を組み合わせた前処理によって、レシピエント肝の50%以上がドナー細胞により置換されたことを確認した。本研究の成果をさらに、発展的に今後遂行予定の研究課題に継承する予定である。

在这项研究中，我们使用纯化的原代肝干/祖细胞来分析肝细胞分化的分子机制，并根据结果，我们使用肝干细胞移植来挽救致死性肝病模型小鼠的生命。移植模型，今年获得了以下结果。 (1).小鼠肝脏干/祖细胞的分离及分化诱导培养体系的建立/完善：2006年继续进行。此外，我们引入了胆管细胞分化系统并获得了稳定的分支形成。 (2).探讨肝细胞分化的分子机制：为了分析转录因子TCF在肝祖细胞中的功能，我们强制表达dnTcf-4并分析其对肝干/祖细胞的影响。在dnTcf-4组中，肝细胞的分化和增殖均受到明显抑制（第43届日本肝脏学会年会报告）。此外，我们还发现转录因子 Prox1 参与肝祖细胞的增殖（Hepatology，出版中）。 (3).肝衰竭模型小鼠细胞移植实验体系的建立：我们建立了使用野生型小鼠进行细胞移植的实验体系，我们还建立了可以判断细胞移植效果的体系。 (4).将肝干/祖细胞移植到肝衰竭模型小鼠中：根据这些结果，我们在肝干/祖细胞中强制表达dnTcf-4并将细胞移植，这导致了移植效果的差异。结果，我们证明TCF在体内控制肝干/祖细胞的增殖能力（第11届日本肝病学会年会报告）。 (5).新型肝功能衰竭模型小鼠细胞移植体系的构建：另外，构建了新型移植模型，通过给药与肝切除相结合的预处理，使50%以上的受体肝脏被移植。确认供体细胞已被更换。我们计划将这项研究的成果继续应用到未来的研究项目中。