肝細胞分化の分子機構の解析と致死的肝不全モデル動物への細胞移植療法の開発

肝细胞分化的分子机制分析及致死性肝衰竭模型动物细胞移植治疗的发展

基本信息

批准号：
18790444
负责人：
柿沼晴
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790444/
关键词：
再生医学肝細胞幹細胞発生・分化細胞移植 Wnt経路 TCF

项目摘要

我々は当該研究において、純化した初代肝幹/前駆細胞を用いて肝細胞分化に関わる分子機構を解析し、その結果をもとに、致死的肝疾患モデルマウスを肝幹細胞の移植によって救命する細胞移植モデルを開発する研究を行い、今年度の成果として下記を得た。(1).マウス肝幹/前駆細胞の分離、分化誘導培養系の確立・改良:平成18年度より継続して施行した。さらに、胆管細胞への分化誘導系も導入し、安定したbranching formationを得た。(2).肝細胞分化の分子機構の探索:肝前駆細胞における転写因子TCFの機能を解析するためdnTcf-4を強制発現させて肝幹/前駆細胞への影響を解析した。dnTcf-4群では肝細胞への分化と増殖の双方が明瞭に抑制された(第43回日本肝臓学会総会などで報告)。さらに転写因子Prox1が肝前駆細胞の増殖に関与することを示した(Hepatology, in press)。(3).肝不全モデルマウスヘの細胞移植実験系の確立:野生型マウスを用いた細胞移植実験系の確立を行ってきたが、放射線照射と肝切除を組み合わせた前処置によって、野生型マウスにも細胞移植の効果を判定できる系を確立した。(4).肝不全モデルマウスヘの肝幹/前駆細胞の移植:この結果に基づき、肝幹/前駆細胞に対してdnTcf-4を強制発現させ、その細胞を移植することで移植効果の差について検討したところ、肝幹/前駆細胞の増殖能をTCFが制御していることをin vivoでも示した(第11回日本肝臓学会大会で報告)。(5).新たな肝不全モデルマウスヘの細胞移植系の構築:さらに新規移植モデルの構築を行い、薬物投与と肝切除を組み合わせた前処理によって、レシピエント肝の50%以上がドナー細胞により置換されたことを確認した。本研究の成果をさらに、発展的に今後遂行予定の研究課題に継承する予定である。

在这项研究中，我们分析了使用纯化的原代肝干/祖细胞参与肝细胞分化的分子机制，并基于结果，我们对开发细胞移植模型进行了研究，该模型通过移植致命的肝脏疾病模型通过移植肝细胞来挽救生命，并获得以下fiscal年度的结果。（1）。小鼠肝干/祖细胞的分离，建立和改善诱导分化培养系统：从2006年开始。此外，引入了将分化系统诱导到胆管细胞中的分化系统，从而导致稳定的分支形成。（2）探索肝细胞分化的分子机制：为了分析转录因子TCF在肝脏祖细胞中的功能，DNTCF-4被迫表达对肝干/祖细胞的影响。在DNTCF-4组中，明显抑制了肝细胞和扩散的分化（在日本肝科学学会第43届股东大会上报道）。此外，转录因子Prox1参与肝脏祖细胞的增殖（肝病，印刷中）。（3）建立用于肝功能衰竭模型小鼠的细胞移植实验系统：我们已经使用野生型小鼠建立了细胞移植实验系统，但是通过预处理辐射辐射和肝切除术，我们建立了一个可以确定野生型小鼠细胞移植有效性的系统。（4）。将肝干/祖细胞移植到肝功能衰竭的小鼠模型中：根据这些结果，我们通过强行表达对肝脏茎/祖细胞的DNTCF-4的移植效应差异和移植细胞。我们还在体内表明，TCF控制着肝脏茎/祖细胞的增殖能力（在第11届日本肝脏社会会议上进行了报道）。（5）。将细胞移植系统构造成新的肝功能衰竭的新小鼠模型：我们进一步构建了一种新的植入模型，并证实，通过结合药物给药和肝切除术的预处理，供体细胞代替了50％以上的受体肝脏。这项研究的结果将进一步转移到计划未来发展的研究主题。