RINとRab5ファミリーの協調による小胞輸送機構の解析

RIN与Rab5家族合作分析囊泡转运机制

• 批准号: 18790046
• 负责人: 梶保 博昭
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790046/
• 关键词: エンドサイトーシス; メンブレントラフィック; 低分子量G蛋白質; Rab; GEF; エンドサイトーシス; メンブレントラフィック; 低分子量G蛋白質; Rab; GEF

申請者は新規のRab5GEFであるRINファミリーの機能解析を進めており、本研究ではRINファミリーによるRab5ファミリーの活性化機構解明を目的として以下の知見を得た。1、RINファミリーとRab5ファミリー間の作用に関する生化学的特性の解析細胞内におけるRINによるRab5ファミリーのGEF活性を、[32Pi]により標識した培養細胞におけるRab5ファミリーと結合するGTP/GDPの比率変化を指標に検討した。その結果RIN2、RIN3は他のRab5GEFと異なりRab22やRab31のGTP結合量を特異的に増大させた事から、細胞内でRIN2、RIN3がRab22、Rab31のGEFとして機能する事を新たに見出した。2、Rab5ファミリーの細胞内局在の検討Rab22が局在している細胞内小器官を同定するために各種オルガネラマーカーにより免疫染色したところ、Rab22は初期エンドソームおよび微小管に局在する事を明らかとした。また、RIN2、RIN3とRab22、Rab31との共発現によりRab22、Rab31が局在している小胞が巨大化する事、さらにこの巨大化がRIN2、RIN3のGEF活性に依存的であることも同時に見出しだ。またTime lapse imagingによりRIN3とRab22、31が細胞内でダイナミックに動くことを見出した。以上の結果より、RIN2、RIN3がRab5のみならずRab22、Rab31のGEFとしても機能することで複雑なエンドサイトーシスを巧みに調節している可能性が示された。

申请人目前正在研究新的Rab5GEF RIN家族的功能分析，在这项研究中，获得了以下发现，目的是通过RIN家族阐明Rab5家族的激活机制。 1。分析了RIN家族与Rab5家族之间作用的生化特性分析RAB5家族在细胞中的Rab5家族的GEF活性使用GTP/GDP的比例变化，该比例的变化是在用[32pi]标记为INTEX的培养细胞中与Rab5家族结合的Rab5家族。结果，与其他RAB5GEF不同，RIN2和RIN3特别增加了Rab22和Rab31的GTP结合量，因此，新发现，RIN2和RIN3充当了细胞中Rab22和Rab31的GEFS。 2。在用各种细胞器进行免疫染色以鉴定Rab22所定位的细胞内细胞器时，检查Rab5家族的亚细胞定位，发现Rab22位于早期内体和微管。还可以说，与Rab22和Rab31的RIN2，RIN3的共表达导致Rab22和Rab31所定位的囊泡变大，并且这种扩大取决于RIN2和RIN3的GEF活性。此外，时间流逝成像表明RIN3，RAB22和31在细胞内动态移动。上述结果表明，RIN2和RIN3可能通过不仅作为RAB5而且作为Rab22和Rab31的GEF来巧妙地调节复杂的内吞作用。