核内情報を制御する分子の創製と新規解析システムによる機能解析

使用新的分析系统创建控制核信息的分子和功能分析

基本信息

批准号：
18790012
负责人：
荒井緑
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は有用な天然化合物の骨格を活かした、核内受容体の転写活性をモジュレートする新しい生理活性化合物を合成するとともに、新規なタンパク質-タンパク質相互作用をハイスループットに評価するアッセイ系の構築を達成した.すなわち大腸癌の発生に関わるWntシグナル伝達系の異常亢進を抑える有用新規化合物を探索するための、ハイスループットなアッセイ系を確立した。Wntシグナル関連タンパク質APCの変異などにより蓄積したβ-cateninは核内で転写因子TCFと結合し、標的遺伝子の転写を促進する。このβ-catenin-TCFの結合を阻害する小分子を当研究室保有の天然物ライブラリーから,見出した.具体的なアッセイはヒトβ-cateninのTCF結合領域であるアルマジロリピートを含む128〜683aa、分子量約67KDaのタンパク質を、GST融合タンパク質として大腸菌から発現し,96穴マイクロプレートに固定した。ヒトTCFタンパク質も同様に大腸菌より大量に発現させることに成功し、蛍光化TCFを作成し、β-catenin-TCF複合体をプレート上で形成させた。化合物を添加,インキュベートしたのち,過剰の化合物とTCFを除く事で,複合体形成を阻害しているかを,蛍光プレートリーダーで評価した.見出された阻害剤のうち数種は,細胞を用いたWnt シグナルのレポータージーンアッセイによる転写活性も阻害し,Wnt シグナルの阻害が,β-catenin-TCF複合体の直接的阻害であることを証明した.

今年，我们将利用有用的天然化合物的骨架来合成调节核受体转录活性的新的生理活性化合物，并构建用于高通量评估新型蛋白质-蛋白质相互作用的检测系统。我们建立了一个高通量检测系统来寻找有用的新化合物来抑制Wnt信号转导系统的异常激活，该系统参与结直肠癌的发展。 β-catenin因Wnt信号相关蛋白APC突变而积累，与细胞核中的转录因子TCF结合，促进靶基因的转录。我们从我们实验室拥有的天然产物库中发现了一种抑制 β-catenin-TCF 结合的小分子。具体测定是使用含有犰狳重复序列的 128-683aa 蛋白进行的，该重复序列是 β-catenin-TCF 的 TCF 结合区域。人β-连环蛋白，分子量约为67KDa，由大肠杆菌表达为GST 融合蛋白，并固定在96 孔微孔板中。同样，我们成功在大肠杆菌中大量表达人类TCF蛋白，产生荧光TCF，并在平板上形成β-连环蛋白-TCF复合物。添加并孵育该化合物后，我们使用荧光板读数器评估了复合物的形成是否通过去除过量的化合物和TCF而受到抑制。报告基因测定也抑制了Wnt信号的转录活性，表明Wnt信号的抑制是一种抑制。直接抑制 β-连环蛋白-TCF 复合物。

项目成果

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专利数量（0）

Naturally occurring small-molecule inhibitors of hedgehog/GLI-mediated transcription

DOI：
10.1002/cbic.200700511
发表时间：
2008-05-05
期刊：
CHEMBIOCHEM
影响因子：
3.2
作者：
Hosoya, Takahiro;Arai, Midori A.;Ishibashi, Masami
通讯作者：
Ishibashi, Masami

Enantioselective glyoxylate-ene reaction using a novel spiro bis(isoxazoline) ligand in copper catalysis

DOI：
10.1016/j.tetasy.2007.02.004
发表时间：
2007-02
期刊：
Tetrahedron-asymmetry
影响因子：
0
作者：
Kazuhiko Wakita;G. B. Bajracharya;M. Arai;S. Takizawa;Takeyuki Suzuki;H. Sasai
通讯作者：
Kazuhiko Wakita;G. B. Bajracharya;M. Arai;S. Takizawa;Takeyuki Suzuki;H. Sasai

Evaluation of C-2-substituted 19-nor-lα, 25-dihydroxyvitamin D_3 analogs as therapeutic agents for prostate cancer

C-2-取代的19-正-1α，25-二羟基维生素D_3类似物作为前列腺癌治疗剂的评价

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Bioorg. Med. Chem. Lett. 17
影响因子：
0
作者：
Kaniwa;K.;Arai;M. A.;Li;X.;Ishibashi. M.
通讯作者：
Ishibashi. M.

Determination of absolute stereochemistry, total synthesis, and evaluation of peptides from the myxomycete Physarum melleum

DOI：
10.1016/j.bmcl.2007.11.005
发表时间：
2008-01-01
期刊：
BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS
影响因子：
2.7
作者：
Hanazawa, Shuwa;Arai, Midori A.;Ishibashi, Masarni
通讯作者：
Ishibashi, Masarni

Kinetic Studies of 25-Hydroxy-19-Nor-Vitamin D_3 and lα, 25-Dihydroxy-19-Nor-Vitamin D_3 Hydroxylation by CYP27B1 and CYP24A1

CYP27B1 和 CYP24A1 对 25-羟基-19-正尔-维生素 D_3 和 lα, 25-二羟基-19-正尔-维生素 D_3 羟基化的动力学研究

DOI：
发表时间：
2007
期刊：
Drug Metabolism and Disposition 35
影响因子：
0
作者：
Urushino;N.;Nakabayashi;S.;Arai;M. A.;Kittaka;A;Chen;T. C.;Yamamoto;K.;Hayashi;K.;Kato;S.;Ohta;M.;Kamakura;M.;Ikushiro;S.;Sakaki;T.
通讯作者：
T.