パラポックスウイルスの病原性を規定する血管内皮増殖因子の各種動物細胞への反応性

血管内皮生长因子的反应性决定了副痘病毒对各种动物细胞的致病性

基本信息

批准号：
18780227
负责人：
猪島康雄
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

パラポックスウイルス(PPV)は,同じ種類のPPVがウシ,ヒツジ,ヤギ,ニホンカモシカに感染するが,症状はウシで軽く,ヒツジ,ヤギで中等度,ニホンカモシカでは重症となることが多い。本研究では,PPVがコードする血管内皮増殖因子(VEGF)の生物学的活性解析を行い,動物種差と病原性差の関係を明らかにする。本年度は,前年度の成果をもとにさらに発展,かつ詳細な解析を行い以下の成果を得た。アミノ酸配列が異なるVEGFをゲノム内に持つPPV3株をウシ,ヒツジ,ニホンカモシカの細胞に感染させ,VEGF mRNAの発現をRT-PCRにより経時的に比較した。アミノ酸配列の違いに関わらず,mRNA発現のタイミングは3株ともそれぞれの細胞で大きな差がないことを明らかにした。次に3種類のVEGFを組換え蛋白として大腸菌で発現させた。モルモットの皮内注射で,組換えVEGFの濃度に依存し血管の透過性が亢進した。しかし3種類のVEGF間では透過性亢進能に大きな差は認められなかった。またヒト臍帯静脈内皮細胞に対する増殖促進活性が3種類とも認められたが,その効果にも大きな差がなかった。ウシ,ヒツジ,ヤギ,ニホンカモシカの腹腔大動脈から無菌的に血管内皮細胞を分離,培養する方法の確立に成功した。ただし,わずかに混入する内皮細胞以外の細胞の除去が解決すべき課題として残っている。以上より,国内で分離したPPVがコードしているVEGFは,アミノ酸配列が異なるにも関わらず,同程度の生物学的活性を有していることを明らかにした。また、ウイルス由来VEGFがPPV感染症の病原性に関与していることが示唆された。さらに,動物種差による病原性の差は,ウイルス側の要因よりも,宿主側に起因する可能性が示唆された。

副毒病毒（PPV）被亚铁，绵羊，山羊和日本甘前甲剂感染了相同类型的PPV，但它们又轻又轻，在绵羊，山羊和日本抗凝结物中通常很严重。在这项研究中，应揭示对由PPV编码的血管内皮生长因子（VEGF）的生物学分析，以阐明动物物种与致病性别之间的关系。今年，进一步开发了上一年的结果，并进行了详细的分析，并获得了以下结果。具有不同氨基酸序列的VEGF通过Faddy，绵羊和日本蚂蚁的细胞传播到基因组中的PPV3菌株，并通过RT-PCR比较了VEGF mRNA的表达。无论氨基酸序列如何，mRNA表达的时机在每个细胞之间都没有很大的差异。接下来，将三种类型的VEGF重组并表示为蛋白质为蛋白质。豚鼠的皮肤注射取决于重组VEGF的浓度，并增强了血管的渗透性。但是，这三种类型的VEGF之间没有显着差异。此外，促进人类脐带素质内皮细胞的生长活性被认为是三种类型的，但是这种作用没有显着差异。一种无菌的方法，将血管内皮细胞与蜜蜂，绵羊，山羊和日本野菜的腹腔主动脉动脉分离和培养血管内皮细胞。但是，除去略有混合的内皮细胞以外的细胞的去除仍然是要解决的问题。从上面的角度来看，尽管氨基酸序列不同，但在日本分离的PPV代码的VEGF具有相同的生物学活性。还建议病毒衍生的VEGF参与PPV感染致病性。此外，有人提出，由于动物物种引起的病原体差异可能是由于宿主侧而不是病毒侧的因素引起的。