生細胞内(insitu)でタンパク質間の相互作用を解析・同定する新規な方法の開発

开发一种原位分析和鉴定蛋白质-蛋白质相互作用的新方法

• 批准号: 18770148
• 负责人: 山口 雄輝
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18770148/
• 关键词: 生体高分子構造・磯能; ケミカルパイオロジー; クロスリンカー; タンパク質間相互作用; ブロテオーム解析; 生体高分子構造・機能; ケミカルバイオロジー; プロテオーム解析

本研究の目的は,生細胞内の目的タンパク質にケミカル(低分子化合物)を導入し,それを利用して近傍の生体分子を同定するという新しい相互作用因子解析法を開発することであり,そのためにまずin vitro のモデル系で検討を行った.転写伸長因子HDAgに,Cys残基を介して光活性化型クロスリンカーAETを導入し, RNAポリメラーゼIIのHDAg結合表面の決定を試みた. RN AポリメラーゼIIは12個のサブユニットからなる.解析の結果,HDAgはRNAポリメラーゼIIのRpblサブユニットのN末端およびRpb2サブユニットのむ末端と特異的にクロスリンクされることが分かった.これらの領域はRNAポリメラーゼIIの立体構造の中でクランプと呼ばれるドメインに相当することから, HDAgはRNAポリメラーゼIIのクランプに結合すると考えられ,転写伸長因子の作用を理解する上で重要な知見が得られた(Yamaguchiら2007).引き続いてin vivo の検討を行なったが,技術的な困難に直面し,期間内に有意義な成果を挙げることができなかった.そこで,これと平行して進めた研究の成果を代わりに報告する.アトラジンは世界で最も多く使われる除草剤の1つだが,植物だけでなく動物に対しても生殖器系などに悪影響を及ぼすことが指摘されている.アトラジンのこうした作用の分子機構を理解するため,アフィニティクロマトグラフィーの手法によりアトラジン結合タンパク質を探索したところ,ミトコンドリアのFIFO-ATP合成酵素が同定された.アトラジンは精子の運動性低下を引き起こすことが知られていたので,それについて調べたところ,アトラジンはFIFO-ATP合成酵素を阻害し,細胞内のATPプールを減少させることで,精子の運動性低下を引き起こすことは判明した(Haseら2008)

这项研究的目的是开发一种新的相互作用因子分析方法，该方法涉及将化学物质（低分子量化合物）引入活细胞中的目标蛋白质中，并使用它们来识别附近的生物分子。我们首先使用体外模型系统对此进行了研究。我们通过Cys残基将光活化交联剂AET引入转录延伸因子HDAg，并尝试确定RNA聚合酶RN的HDAg结合表面。聚合酶II由12个亚基组成。分析结果发现，HDAg与RNA聚合酶II的Rpbl亚基的N末端和含有Rpb2亚基的末端特异性交联，因为该区域对应于a。 RNA聚合酶II的三维结构中称为钳子的结构域， HDAg 被认为与 RNA 聚合酶 II 的夹子结合，这是理解转录延伸因子作用的重要发现（Yamaguchi 等，2007）。然而，由于技术困难，我们无法在这段时间内取得任何有意义的结果，因此，我们将改为报告并行进行的研究结果，莠去津虽然是世界知名的最常用的除草剂之一。 ，有人指出它不仅对植物而且对动物的生殖系统都有不良影响。为了了解莠去津这种作用的分子机制，我们使用了亲和色谱。当我们使用 Fee 的方法搜索莠去津结合蛋白时，我们发现了线粒体 FIFO-ATP 合酶，因为已知莠去津会导致精子活力下降，因此我们对此进行了研究，发现莠去津是一种 FIFO-ATP 合酶。发现抑制 ATP 合成酶并减少细胞内 ATP 库会导致精子活力下降（Hase 等人，2008）

项目成果

Hepstitis Delta Virus

丁型肝炎病毒

• 发表时间: 2006
• 作者: Handa;H.;Yamaguchi;Y.(Ed.)
• 通讯作者: Y.(Ed.)

NELF interacts with CBC and participates in 3'-end processing of replication-dependent histone mRNAs

NELF 与 CBC 相互作用并参与复制依赖性组蛋白 mRNA 的 3 端加工

• 发表时间: 2007
• 期刊: Mol Cell. 26
• 作者: Narita T;Yung T M C;Yamamoto J Tsuboi Y;Tanabe H;Tanaka K;Yamaguchi Y;Handa H
• 通讯作者: Handa H

Transcriptional pausing caused by NELF plays a dual role in regulating immediate-early expression of the junB gene

• DOI: 10.1128/mcb.02366-05
• 发表时间: 2006-08-01
• 期刊: MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.3
• 作者: Aida, Masatoshi;Chen, Yexi;Handa, Hiroshi
• 通讯作者: Handa, Hiroshi

Differential regulation of NF-kB by elongation factors is determined by core promoter type

延伸因子对 NF-kB 的差异调节取决于核心启动子类型

• 发表时间: 2007
• 期刊: Molecular and Cellular Biology 27・14
• 作者: Amir-Zilberstein;L.;Ainbinedr;E.;Taube;L.;Yamaguchi;Y.;Handa;H.;Dikstein;R.
• 通讯作者: R.

TFII-I down-regulates a subset of estrogen-responsive genes through its interaction with an initiator element and estrogen receptor α

• DOI: 10.1111/j.1365-2443.2006.00952.x
• 发表时间: 2006-04-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Ogura, Y;Azuma, M;Handa, H
• 通讯作者: Handa, H