姉妹染色分体間の接着形成に必須なアドヘリン複合体の分子機能の探求

探索姐妹染色单体之间粘附形成所必需的粘附蛋白复合物的分子功能

基本信息

批准号：
18770149
负责人：
須谷尚史
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

真核生物の姉妹染色分体はコヒーシン複合体により接着されており、この接着は遺伝情報の正確な分配・継承に必須である。本研究ではコヒーシンの染色体結合が時空間的にどう制御されているかを、コヒーシンの染色体結合を司る出芽酵母Scc2 (アドヘリン)のゲノム学・生化学的解析を通じて探求した。以下の諸点が明らかとなった。1,動原体とそれ以外の染色体部位(以下、染色体腕部)でコヒーシンの染色体結合は異なって制御されていた。動原体ではGI後期より結合が見られ、結合は動原体微小菅を破壊すると促進された。動原体コヒーシンの生理的意味を探るため、現在動原体への結合のみに欠損を示すScc2変異体を単離している。2,腕部のコヒーシンはS期に結合が開始した。DNA複製やS期誘導キナーゼには依存しないが、複製チェックポイントの制御下にはあった。その詳細な制御機構の解明は今後の課題である。3, Scc2は染色体腕部に遍在しており、Scc2の認識する染色体上因子はヒストンないしDNAであることが示唆された。現在生化学的検証が進行中である。4,Scc2は少なくとも3つのドメインをもち、N末Scc4サブユニットへの結合ドメイン、C末はコヒーシンとの相互作用ドメインであった。中央部は未同定の、しかし必須な機能をもつドメインであることも分かった。より詳細な生化学的解析に必要なコヒーシン、Scc2,Scc4タンパク質の大量発現系を構築した。コヒーシンは姉妹染色分体間接着のみならず、DNA修復や転写調節にも機能する重要な核内構造調節因子であることが分かってきている。いかにゲノムの特定部位に必要なタイミングでコヒーシンを結合させるのか、そのメカニズムの解明に向けた重要な基礎となる知見が本研究から得られたと考えている。なお、現在解明された点を発表すべく投稿論文を準備しているところである。

真核生物姐妹染色质是由粘蛋白复合物粘附的，这种粘附对于遗传信息的准确分布和遗传至关重要。在这项研究中，我们探讨了如何通过SCC2（Adherin）的基因组和生化分析来控制粘蛋白染色体结合，这是一种控制粘质染色体结合的发芽酵母。已经揭示了以下几点：1。在丝粒和其他染色体部位（以下称为染色体臂），粘蛋白的染色体结合受到不同的控制。从GI晚期可以看到丝粒结合，并通过破坏丝粒微酶来促进结合。为了探索丝粒粘着素的生理意义，我们目前正在分离目前缺乏与丝粒体结合的SCC2突变体。 2。手臂中的粘着蛋白在S期开始结合。尽管它不取决于DNA复制或S期诱导的激酶，但它在复制检查点的控制下。对控制机制的详细阐明将是未来的问题。 3。SCC2在染色体臂中无处不在，表明SCC2识别的染色体因子是组蛋白或DNA。目前正在进行生化验证。 4，SCC2至少具有三个结构域，与N末端SCC4亚基结合结构域，而C末端是与粘着蛋白的相互作用结构域。还发现中央部分是一个身份不明但必不可少的域。我们构建了一个用于粘蛋白，SCC2和SCC4蛋白的大型表达系统，这对于更详细的生化分析是必需的。已发现粘着素是一种重要的核结构调节剂，它不仅在姐妹染色单体之间起作用，而且在DNA修复和转录调控中起作用。我们认为，这项研究提供了重要的基本知识，以阐明在必要的时机下在特定基因组处的粘蛋白结合的机制。此外，我们目前正在准备提交的论文，以介绍已澄清的要点。