植物微生物間相互作用における環状トリテルペノイド生合成酵素の役割

环状三萜生物合成酶在植物-微生物相互作用中的作用

• 批准号: 06J51012
• 负责人: 澤井 学
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J51012/
• 关键词: 環状トリテルペノイド; ミヤコグサ; lanosterol; オキシドスクアレン閉環酵素; ステロール; 植物微生物間相互作用; 形質転換植物

高等植物は、生存に必須なステロールを含む、多様な環状トリテルペノイドを生成する。その中には薬理活性、アレロパシー活性を示すものが含まれ、植物の成長・分化、根圏微生物との相互作用への関与も期待されている。今回、環状トリテルペノイドの植物生理学的な役割の解明のため、ミヤコグサより単離した3種のオキシドスクアレン閉環酵素(OSC)(β-amyrin合成酵素、lupeol合成酵素、cycloartenol合成酵素)cDNAを用いた形質転換ミヤコグサを作出した。RT-PCRを行った結果、それぞれ5-10の形質転換体ラインの構築が確認できた。特に根粒菌との相互作用への影響が期待されるβ-amyrin合成酵素過剰発現体は、T1個体を用い、フローサイトメトリー、RT-PCRによる2倍体形質転換体選抜を行った。現在、無菌播種したT2個体に根粒菌接種実験を行っている。一方、ミヤコグサOSC遺伝子解析の過程で、真核生物ステロール生合成の常識を覆し、植物のlanosterol合成酵素(LAS)の存在を比較ゲノム学的手法にて初めて明らかにした。シロイヌナズナ、オタネニンジンでもLASが同定され、双子葉植物一般にLASが存在すると考えられる。LASはナス科植物が生成し、抗菌、毒性を持つステロイドアルカロイドサポニンといつた生態生理活性物質の生成への関与が期待される。今回、LAS過剰発現、発現抑制形質転換トマト作成用ベクターを構築した。LAS過剰発現ベクターは、ミヤコグサLAScDNAを用いて構築した。発現抑制には、トマトESTデータベースより見いだしたLASの部分長cDNA(120bp)を、トマト(マイクロトム)未成熟果実よりRT-PCRにより増幅してpGWB80に導入しRNAi用ベクターとした。作成したベクターはAgrobacterium tumefaciensに導入した。

较高的植物会产生各种环状三萜类化合物，包括生存至关重要的固醇。其中包括表现出药理和化属性活性的那些，预计将参与植物生长和分化以及与根际微生物的相互作用。在本文中，为了阐明环状三萜类化合物的植物生理作用，我们使用三种类型的Kogusa使用了三种类型的Kogusa插入环环酶（OSC）（OSCS）（OSCS）（β-氨基蛋白合酶，卢匹醇合酶，lupeol Synthanse和cincloartenol Synthenol合成酶）cdnas cdnas cdnas cidnas cidnas sailed Kogogusa。 RT-PCR确认构建了5-10的转换线。特别是，过表达的β-氨基蛋白合酶有望对与根瘤菌的相互作用产生影响，用于使用T1个个体通过流式细胞仪和RT-PCR选择二倍体转化体。目前，正在对无菌种子T2个体进行根茎接种实验。同时，在对OSC的OSC基因的分析过程中，首先使用比较基因组方法揭示了真核固醇生物合成的常识，并首先揭示了植物中羊毛蛋白合酶（LAS）的存在。在拟南芥和人参中也发现了LAS，一般来说，LAS存在于双子叶植物中。 LAS由茄科植物产生，预计将参与抗菌和有毒类固醇生物碱皂苷和生态活性物质的产生。在本文中，我们构建了一个载体，用于创建LAS过表达和对转化西红柿的表达抑制。使用Yamolgus Las cDNA的LAS cDNA构建LAS过表达载体。为了抑制表达，从番茄EST数据库中发现的部分长度cDNA（120 bp）通过未成熟番茄（微骨）水果的RT-PCR放大，并引入PGWB80中以形成RNAi载体。将创建的载体引入了农杆菌。