免疫制御剤サリドマイドに結合する因子群の細胞内における機能解析

与免疫调节剂沙利度胺结合的因子的细胞内功能分析

• 批准号: 06J05754
• 负责人: 伊藤 拓水
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J05754/
• 关键词: サリドマイド; ケミカルバイオロジー; 分子生物学

研究は前年度および研究計画に引き続き実施した。前年度によりTHIR2はタンパク質分解系に関わる酵素複合体を形成し、サリドマイドはregulatorであるRをTHIR2から解離させることにより作用することが判明している。そこで今年度は、この現象がin vivoにおいていかなる意義があるのかを検証するために、ゼブラフィッシュをモデル動物として用いた解析を行った。ゼブラフィッシュを受精後3時間において800uMのサリドマイドを投与したlingerにて薬浴させることにより、ヒトにおける耳の奇形(縮小)を再現することが判明した。そしてTHIR2の遺伝子発現を抑制するモルフォリノアンチセンスオリゴを作成し、ゼブラフィッシュ胚にマイクロインジェクションさせたところ、同様の耳の縮小を検出することに成功した。次に、耳の奇形がTHIR2のみを介しているかどうかを確かめるために、サリドマイド非結合型点変異体の作成を行った。THIR2のC末にサリドマイドが結合することは前年度までの解析により判明していたが、さらに絞り込みを行い、サリドマイド結合能が野生型の1/10-100の点変異体を作成することに成功した。今後、THIR2をノックダウンしたゼブラフィッシュにおいて以上のサリドマイド非結合型点変異体を発現するmRNAを導入することでrescue実験を行い、その上でサリドマイドを薬浴した際に、奇形が生じないかどうかを検証する予定である。またRに対するモルフォリノをゼブラフィッシュに導入した際に、THIR2を抑制した表現型もしくはサリドマイドを薬浴させた表現型と類似しているかを検証することを計画している。

研究延续了上一年的研究计划。去年揭示了 THIR2 形成了一种参与蛋白质降解系统的酶复合物，而沙利度胺通过将调节器 R 从 THIR2 解离来发挥作用。因此，今年，为了验证这一现象在体内的意义，我们以斑马鱼为模型动物进行了分析。通过在受精后3小时将斑马鱼浸泡在含有800 uM沙利度胺的浴液中，发现可以复制人类的耳朵畸形（缩小）。当他们创造出一种抑制 THIR2 基因表达的吗啉代反义寡核苷酸并将其显微注射到斑马鱼胚胎中时，他们成功地检测到了类似的耳朵收缩。接下来，为了确认耳朵畸形是否仅由 THIR2 介导，我们创建了不含沙利度胺的点突变体。尽管通过去年的分析得知沙利度胺与THIR2的C末端结合，但我们进一步缩小了范围，并成功创建了沙利度胺结合能力为野生型1/10-100的点突变体。未来，我们将通过将表达上述沙利度胺非结合点突变体的mRNA导入敲除THIR2的斑马鱼中进行拯救实验，并测试沙利度胺在斑马鱼中沐浴时是否会出现畸形，我们计划对此进行验证。我们还计划验证，当将针对 R 的吗啉代引入斑马鱼时，表型与通过抑制 THIR2 或用沙利度胺沐浴所获得的表型相似。

项目成果

精神遅滞関連因子CRBNはDDB1と共に新規E3ユビキチンリガーゼ複合体を形成する

精神发育迟滞相关因子CRBN与DDB1形成新型E3泛素连接酶复合物

• 发表时间: 2007
• 作者: 伊藤 拓水;堀田 健太郎;石原 聡;半田 宏
• 通讯作者: 半田 宏

A celecoxib derivative potently inhibits proliferation of colon adenocarcinoma cells by induction of apoptosis.

塞来昔布衍生物通过诱导细胞凋亡有效抑制结肠腺癌细胞的增殖。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Anticancer Res. Sep-Oct; 26 (5A)
• 作者: Kusunoki N;Ito T;Sakurai N;Handa H;Kawai S
• 通讯作者: Kawai S