免疫制御剤サリドマイドに結合する因子群の細胞内における機能解析

与免疫调节剂沙利度胺结合的因子的细胞内功能分析

• 批准号: 06J05754
• 负责人: 伊藤 拓水
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J05754/
• 关键词: サリドマイド; ケミカルバイオロジー; 分子生物学

研究は前年度および研究計画に引き続き実施した。前年度によりTHIR2はタンパク質分解系に関わる酵素複合体を形成し、サリドマイドはregulatorであるRをTHIR2から解離させることにより作用することが判明している。そこで今年度は、この現象がin vivoにおいていかなる意義があるのかを検証するために、ゼブラフィッシュをモデル動物として用いた解析を行った。ゼブラフィッシュを受精後3時間において800uMのサリドマイドを投与したlingerにて薬浴させることにより、ヒトにおける耳の奇形(縮小)を再現することが判明した。そしてTHIR2の遺伝子発現を抑制するモルフォリノアンチセンスオリゴを作成し、ゼブラフィッシュ胚にマイクロインジェクションさせたところ、同様の耳の縮小を検出することに成功した。次に、耳の奇形がTHIR2のみを介しているかどうかを確かめるために、サリドマイド非結合型点変異体の作成を行った。THIR2のC末にサリドマイドが結合することは前年度までの解析により判明していたが、さらに絞り込みを行い、サリドマイド結合能が野生型の1/10-100の点変異体を作成することに成功した。今後、THIR2をノックダウンしたゼブラフィッシュにおいて以上のサリドマイド非結合型点変異体を発現するmRNAを導入することでrescue実験を行い、その上でサリドマイドを薬浴した際に、奇形が生じないかどうかを検証する予定である。またRに対するモルフォリノをゼブラフィッシュに導入した際に、THIR2を抑制した表現型もしくはサリドマイドを薬浴させた表現型と類似しているかを検証することを計画している。

该研究是在上一年和研究计划之后进行的。在上一年，THIR2形成了涉及蛋白水解系统的酶复合物，发现沙利度胺通过将调节剂与THIR2解离来起作用。因此，今年为了验证体内这种现象的重要性，我们使用斑马鱼作为模型动物进行了分析。发现斑马鱼被施肥后3小时，在持续的持续状态下，在人类中复制耳朵畸形（减少）。然后，产生了抑制THIR2基因表达并将其显微注射到斑马鱼胚胎中，并检测到类似的耳朵收缩的吗啡反义寡素。接下来，为了确定耳朵畸形是否是通过THIR2介导的，创建了非thalidomide unbound点突变体。直到上一年的分析表明，沙利度胺与THIR2的C末端结合，但进行了进一步的缩小，我们成功地创建了具有野生型的甲状酸少蛋白结合能力的1/10-100点突变体。将来，我们计划通过引入斑马鱼中表达上述无层胺的点突变体的mRNA来进行救援实验，该突变体已击倒Thir2，然后验证畸形时是否发生畸形时发生畸形。我们还计划验证是否将Rempholino引入斑马鱼中，还是类似于抑制Thir2的表型，还是使用沙利度胺用于治疗它的表型。

项目成果

精神遅滞関連因子CRBNはDDB1と共に新規E3ユビキチンリガーゼ複合体を形成する

精神发育迟滞相关因子CRBN与DDB1形成新型E3泛素连接酶复合物

• 发表时间: 2007
• 作者: 伊藤 拓水;堀田 健太郎;石原 聡;半田 宏
• 通讯作者: 半田 宏

A celecoxib derivative potently inhibits proliferation of colon adenocarcinoma cells by induction of apoptosis.

塞来昔布衍生物通过诱导细胞凋亡有效抑制结肠腺癌细胞的增殖。

• 发表时间: 2006
• 期刊: Anticancer Res. Sep-Oct; 26 (5A)
• 作者: Kusunoki N;Ito T;Sakurai N;Handa H;Kawai S
• 通讯作者: Kawai S