L型DNA固定化DNAマイクロアレイの開発とCAGリピート結合分子の開発

L型DNA固定化DNA微阵列和CAG重复结合分子的开发

• 批准号: 06J03285
• 负责人: 林 剛介
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06J03285/
• 关键词: 翻訳活性化; アンチセンス; PURESYSTEM; GFP; aptamer; azobenzene; photoswitch; SPR; in vitro selection; L型DNA; SPR imaging; PCR; SNP

生体内で遺伝子発現を抑制する方法としてRNAi法やアンチセンス法がある。これらの方法ではmRNAに対して相補的な配列を持つ一本鎖RNAあるいはDNA(アンチセンスオリゴ)が機能の中核を担っている。アンチセンス法ではアンチセンスオリゴがmRNAと相補鎖を形成した後、RNase HによってmRNAの切断が起こる経路、または、相補鎖形成が翻訳開始複合体の形成を阻害する経路のどちらかでタンパク質の翻訳を抑制する。このように、遺伝子発現を翻訳段階で抑制する方法論は確立されてきているが、逆に、遺伝子発現を促進させる方法論はまだほとんどない。今回我々は、RNase Hが存在しない無細胞翻訳系で、GFPメッセンジャーRNAの翻訳領域に相補的なアンチセンスオリゴが、翻訳反応を促進させることを見出した。我々は、再構成系の無細胞翻訳系であるPURESYSTEMを用いて、GFPの翻訳反応を行った。この反応系中に、GFPのmRNAに対するアンチセンスオリゴを加えると、リボソーム結合サイトや開始コドン付近にハイブリダイズするものは、翻訳されるGFPタンパク量の低下を示したのに対し、より下流にハイブリダイズするアンチセンスオリゴのいくつかは、1.5〜2倍程度の翻訳量の上昇を促す事が確認された。これは、アンチセンスオリゴのmRNAの複合体形成が、より翻訳開始複合体の形成に有利なmRNA構造を誘起したためだと考えている。これからより詳細に調査して行きたい。

有RNAi方法和反义方法可以抑制活体中的基因表达。在这些方法中，具有与mRNA的互补序列的单个链RNA或DNA（抗sense寡素）具有该功能的核心。根据抗渗透方法，在抗sense Oligo形成一个与mRNA的互补链之后，或者通过rNase H切割mRNA的踪迹，或者用蛋白质的翻译与抑制翻译复合物形成的路径的翻译。被抑制。以这种方式，已经建立了在翻译阶段抑制遗传表达的方法，但相反，几乎没有促进基因表达的方法。这次，我们发现没有RNase H的GFP Messenger RNA的翻译区域中的补偿反性寡素促进了翻译反应。我们使用无单元的平移系统Puresystem来翻译GFP。在此反应系统中，如果添加了GFP的抗sense寡素到mRNA，则与核糖体结合位点的杂种或起始密码子表示杂交的量减少，但杂种进一步确认了下游。一些令人眼花sense骨的寡素促进了大约1.5至2倍的翻译量的增加。我认为这是因为反性寡素mRNA的复合形成引起了mRNA结构，这对于形成翻译起始复合物更有优势。从现在开始，我想更详细地调查。

项目成果

アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた無細胞翻訳系中でのGFPメッセンジャーRNAの翻訳促進

使用反义寡核苷酸在无细胞翻译系统中促进 GFP 信使 RNA 的翻译

• 发表时间: 2008
• 作者: Hayashi G.;Hagihara M.;Nakatani K.
• 通讯作者: Nakatani K.

Photoregulation of a peptide-RNA interaction on a gold surface

• DOI: 10.1021/ja071298x
• 发表时间: 2007-07-18
• 期刊: JOURNAL OF THE AMERICAN CHEMICAL SOCIETY
• 影响因子: 15
• 作者: Hayashi, Gosuke;Hagihara, Masaki;Nakatani, Kazuhiko
• 通讯作者: Nakatani, Kazuhiko

Reversible regulation of binding between a photoresponsive peptide and its RNA aptamer

光响应肽与其RNA适体之间结合的可逆调节

• 发表时间: 2007
• 期刊: Nucleic Acid Symposium Series 51
• 作者: Hayashi G.;Hagihara M.;Dohno C.;Nakatani K.
• 通讯作者: Nakatani K.

光応答性リボスイッチを指向したRNA-リガンド間の結合制御

RNA-配体与光响应核糖开关结合的调控

• 发表时间: 2008
• 作者: Hayashi G.;Hagihara M.;Dohno C.;Nakatani K.
• 通讯作者: Nakatani K.

光を用いたRNA-ペプチド結合のスイッチング

利用光切换 RNA-肽键

• 发表时间: 2007
• 作者: Hayashi G.;Hagihara M.;Dohno C.;Nakatani K.
• 通讯作者: Nakatani K.