体細胞クローン技術における核の初期化機構の解明

体细胞克隆技术中核重编程机制的阐明

基本信息

批准号：
06J00823
负责人：
若山清香
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

体外受精に失敗した卵子を用いたマウスの体細胞クローンES細胞の作製クローン動物の作出や、クローン胚から免疫拒絶反応が起こらない患者自身のオーダーメイドES細胞(クローンES細胞)を樹立するためには、新鮮な卵子が不可欠だと考えられてきた。しかし韓国の論文捏造事件でも議論されたが、この技術の最大の問題点は健康な女性から多数の新鮮な卵子の提供を受けなければならないことであり、コスト面だけでなく倫理面からも卵子の利用が制限されていた。ところが体外受精などを行う不妊治療の現場では、受精しなかった卵子が毎日たくさん破棄されている。もしこの廃棄されている受精しなかった卵子を核移植に使うことができれば、使用できる卵子の制限がなくなり研究が大きく前進するだろう。そこで我々はマウスの体外受精を行い、受精失敗加齢卵子(Aged,fgrtilization-failure oocyte: AFF卵子)を用いて核移植を行ってみた。その結果、クローン胚盤胞まで発生した胚からは、クローンES細胞が比較的高率に樹立でき新鮮卵子を用いた場合との差は見られなかった。次に、AFF卵子から樹立されたクローンES細胞が本当にES細胞と呼べるものなのか調べてみた。核型およびES細胞のマーカー染色はすべて正常であり、またクローンES細胞由来の4倍体キメラも生まれてきた。これらの実験により、AFF卵子を利用して樹立されたクローンES細胞が受精卵由来ES細胞とまったく同等であることが証明できた。

使用体外受精失败的卵子创建小鼠体细胞克隆ES细胞为了创建克隆动物并从克隆胚胎中建立患者自己的定制ES细胞（克隆ES细胞），人们认为不会引起免疫排斥。新鲜的鸡蛋是必不可少的。然而，正如韩国研究论文造假案中所讨论的那样，这项技术的最大问题是它需要从健康女性那里获得大量的新鲜卵子，这不仅具有成本效益，而且在伦理上的使用受到限制。然而，在涉及体外受精的不孕不育治疗中，每天都会丢弃许多未受精的卵子。如果这些废弃的未受精卵可以用于核移植，那么可以使用的卵子数量将不受限制，研究将取得巨大进展。因此，我们对小鼠进行体外受精，并使用老化的受精失败卵母细胞（AFF 卵母细胞）进行核移植。因此，从胚胎发育到克隆囊胚，可以以相对较高的速度建立克隆 ES 细胞，与使用新鲜鸡蛋时没有发现任何差异。接下来，我们研究了从AFF卵建立的克隆ES细胞是否真的可以称为ES细胞。核型和ES细胞标记染色均正常，并且还产生了源自克隆ES细胞的四倍体嵌合体。这些实验表明，使用AFF卵建立的克隆ES细胞与受精卵衍生的ES细胞完全等同。