細胞増殖に対するエストロジェンの抑制作用に関する分子機構の解明

阐明雌激素抑制细胞增殖的分子机制

基本信息

批准号：
18890078
负责人：
三井哲雄
金额：
$ 1.82万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18890078/
关键词：
マイクロアレイ遺伝子シグナル伝達細胞増殖エストロジェン

项目摘要

細胞増殖に対するエストロジェンの抑制作用のメカニズムを解明するために、ラット下垂体前葉初代培養細胞を実験モデルとして用いて、以下に示す実験を行った。1.エストロジェンによる細胞増殖抑制時の遺伝子発現を網羅的に解析し、エストロジェンの増殖抑制作用に伴って変化する遺伝子を同定する目的で、ラット下垂体前葉の無血清初代培養細胞に、対照群としてIGF-1(50ng/ml)を単独投与し、実験群にはIGF-1およびestradiol(1nM)を同時投与し、投与4時間後に培養細胞からtotal RNAを抽出し、これらの対照群と実験群の間でDNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。その結果、estradiolの同時投与により、対照群に対して88個の遺伝子発現が減少し、79個の遺伝子発現が増加していた。これら発現量の変化した遺伝子は、細胞周期調節蛋白、成長因子、転写因子を含んでいた。また、DNAマイクロアレイの結果を確認するために、同様な方法で採取したtotal RNAを用いて、real time reverse transctiption (RT)-PCR法により、確認実験を行った。この結果、DNAマイクロアレイの結果と同様な遺伝子発現変化を確認した。2.エストロジェン投与による遺伝子発現変化の増殖刺激特異性を調べるために、非投与群、IGF-1単独投与群、estradiol単独投与群、IGF-1およびestradiol同時投与群を設け、得られたtotal RNAをreal time RT-PCR法によって解析した結果、IGF-1存在下でE2投与により発現量が変化した遺伝子の中には、IGF-1と相乗的に発現量が変化する遺伝子、独立して変化する遺伝子、及び拮抗して変化する遺伝子に分類されることが示された。これらの結果から、estradiol投与により発現量が変化した遺伝子の一部が、ラット下垂体前葉細胞(プロラクチン産生細胞)に対するestradiolの増殖抑制作用と関係していることが示唆された。

为了阐明雌激素对细胞增殖的抑制作用的机制，使用原代培养的大鼠垂体细胞作为实验模型进行了以下实验。 1. To comprehensively analyze gene expression during cell growth suppression by estrogen, and to identify genes that change with the growth inhibition effect of estrogen, IGF-1 (50 ng/ml) was administered as a control group to serum-free primary cultured cells in the anterior pituitary gland, IGF-1 and estradiol (1nM) were co-administered to the experimental group, total RNA was extracted from the cultured给药后4小时细胞和基因表达分析通过这些对照组和实验组之间的DNA微阵列进行。结果，与对照组相比，雌二醇同时降低了88个基因的表达，并增加了79个基因的表达。这些表达水平改变的基因包括细胞周期调节蛋白，生长因子和转录因子。此外，为了确认DNA微阵列的结果，使用以相同方式收集的总RNA使用实时反向转移（RT）-PCR进行了确认实验。结果，基因表达的变化与DNA微阵列中的基因表达相同。 2。为了研究由雌激素给药引起的基因表达变化的特异性，单独使用了一组非辅助IGF-1，单独使用雌二醇以及同时给予IGF-1和雌二醇，提供了由实时RT-PCR方法分析的，其表达级别的e2级别在于，其表达级别的e2级别在于，其表达级别的e2均变化了，其表达级别是e2均变化的。与IGF-1，独立变化的基因和拮抗作用变化的基因协同变化。这些结果表明，雌二醇给药改变了表达水平的某些基因与雌二醇对大鼠前垂体细胞（催乳素产生细胞）的增殖抑制作用有关。