ウイルスはどのようにして宿主プランクトンをみわけるか?

病毒如何区分宿主浮游生物？

基本信息

批准号：
18880044
负责人：
白井葉子
金额：
$ 1.8万
依托单位：
Fisheries Research Agency
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究課題では、海水中に浮遊するウイルスと宿主プランクトンの相互識別に係る分子機構ならびに宿主特異性等を巡るウイルス株間の多様性を精査し、ウイスルと宿主赤潮藻の生態学的相互関係の解明すに資することを目的とした。Havゲノム上に存在する多数の繰り返し領域を含むVp260様遺伝子全域のPCRによる増幅は困難であった。そこで繰り返しドメインを抽出し、部分的反復配列のPCR増幅を試みた。反復モチーフ毎の塩基配列のバリエーションを踏まえデジェネレートプライマーを作製し、PCRを実施したところ、1-3反復配列(ラダー状バンド)を増幅・検出することができた。PCRを行う際にホルムアミドを添加し繰り返し分子の高次構造が解消することで、増幅に有効に作用したものと推測された。これらの産物をライゲートしたプラスミドを発現解析に供したが、通常の大腸菌およびレアコドンのtRNAを補充した発現用大腸菌を用いた発現系のいずれにおいても、(沈澱・上清画分のいずれにも)目的タンパク質の発現はみられなかった。今後、昆虫細胞や無細胞系の利用を考える必要があると思われる。HaVを接種した場合でも見かけ上顕著な増殖阻害がみられない宿主倍養について、細包内でのウイルス感染が成立しているかどうかを、ノーザンハイブリダイゼーション法により精査した。その結果、弱毒性反応区においてもウイルス感染陽性反応が認められた。今後、宿主表面へのウイルスの非特異的吸着の可能性を完全に排除する実験系を組むことができれば、高感度でのウイルス感染判定を実現することが可能であると考えられた。この結果から、HaV株と宿主ヘテロカプサ株の組み合わせによって、溶藻の程度は大きく異なり、光学顕微鏡観察では感染を検出できない場合があることが明らかとなった。これにより、ウイルス対宿主の生態学的関係を考える上できわめて有用な情報を得ることができた。

该研究主题旨在仔细研究与在海水和宿主浮游生物中漂浮的病毒相互鉴定有关的分子机制，以及病毒（例如宿主特异性）之间的多样性，并有助于阐明病毒与宿主之间的生态关系和宿主红潮汐藻类。 PCR通过PCR进行了整个VP260样基因的扩增，这些基因包含HAV基因组上存在的许多重复区域。然后重复提取域，并尝试对部分重复序列进行PCR扩增。根据每个重复基序的碱基序列的变化制备退化引物，并进行PCR，并放大并检测到1-3个重复序列（梯子样带）。据估计，在PCR期间添加甲酰胺以消除分子的重复高阶结构，这有效地放大。尽管将与这些产物连接的质粒用于表达分析，但在正常的大肠杆菌或使用大肠杆菌中，未观察到靶蛋白的表达（在沉淀或上清液分数中），用于补充稀有密码子tRNA的表达。似乎我们将来需要考虑使用昆虫细胞和无细胞系统。通过北部杂交检查是否已经检查了是否建立了糖中的病毒感染，宿主加倍的营养物质似乎没有任何显着的生长抑制作用。结果，在减毒反应区域也观察到阳性病毒感染。人们认为，如果可以构建实验系统以完全消除将来非特异性病毒吸附到宿主表面的可能性，那么就可以实现病毒感染检测的高灵敏度。这些结果表明，根据HAV菌株和宿主杂质菌株的结合，裂解藻类的程度差异很大，并且光学显微镜可能无法检测到感染。这为考虑病毒与宿主之间的生态关系提供了非常有用的信息。