創傷歯髄から単離した新規遺伝子FIP-2による歯髄炎症のコントロール法の探索

利用从受伤牙髓中分离出的新基因 FIP-2 寻找控制牙髓炎症的方法

基本信息

批准号：
18799006
负责人：
山本直史
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

歯髄組織の保存および象牙質の再生を促進するためには,歯髄炎症を分子生物学的アプローチからコントロールすることが有効であると考えられる。本年度は,ラット創傷歯髄から単離した新規遺伝子FIP-2の発現抑制による歯髄炎症のコントロールを目標として,FIP-2が制御する炎症性シグナル分子機構および細胞死への影響を調べた。FIP-2に特異的なsiRNAを含む発現ベクターをラット腎臓細胞に遺伝子導入・薬剤選択培養し,FIP-2を発現抑制した細胞株(FIP-2KD)を確立した。FIP-2-KDおよびMockの細胞株をそれぞれ無刺激または過酸化水素にて刺激し,細胞内蛋白の発現変化を抗体アレイで解析し,制御因子の相互関係をIngenuity Signaling Pathways Knowledge Baseを用いてパスウェイ解析を行った。Mockに比較してFIP-2-KDでは,一連の細胞増殖因子mitogen activated protein kinase(MAPKS),myelocytosis(MYC),細胞周期制御因子cyclin dependent kinase(CDKS),そしてcell division cycle(CDCS)のシグナルが増強していた。また,細胞死制御因子であるCaspasesのシグナルが減弱していた。一方,過酸化水素で刺激下では,一連の細胞周期制御因子,細胞増殖因子,そして細胞死制御因子の発現が,顕著に抑制されており,DNAの断片化を示すTUNEL陽性細胞はFIP-2-KDにおいて著しく少なかった。以上の結果から,FIP-2は,炎症性反応のなかで発現増加し,細胞死を促進させる因子であることが示唆された。FIP-2を局所的に発現抑制することは歯髄の炎症反応の改善に役立つ可能性がある。

为了保护牙髓组织并促进牙本质再生，从分子生物学方法控制牙髓炎症被认为是有效的。今年，我们研究了FIP-2调节的炎症信号分子机制及其对细胞死亡的影响，目的是通过抑制从大鼠受伤牙髓中分离出的新基因FIP-2的表达来控制牙髓炎症。我们将含有FIP-2特异性siRNA的表达载体导入大鼠肾细胞中，并用药物选择性培养它们，以建立FIP-2表达被抑制的细胞系（FIP-2KD）。 FIP-2-KD 和 Mock 细胞系未经刺激或用过氧化氢刺激，使用抗体阵列分析细胞内蛋白质表达的变化，并使用 Ingenuity Signaling Pathways 知识库分析调节因子的相互关系。。与Mock相比，FIP-2-KD信号一系列细胞生长因子丝裂原激活蛋白激酶（MAPKS）、骨髓细胞增多症（MYC）、细胞周期调节因子细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKS）和细胞分裂周期（CDCS）增加。此外，细胞死亡调节因子半胱天冬酶的信号也减弱了。另一方面，在过氧化氢刺激下，一系列细胞周期调节因子、细胞生长因子和细胞死亡调节因子的表达被显着抑制，表现出DNA片段化的TUNEL阳性细胞在KD中显着减少。这些结果表明FIP-2是一种在炎症反应过程中表达增加并促进细胞死亡的因子。局部抑制 FIP-2 表达可能有助于改善牙髓炎症反应。